Estrategias para aumentar los niveles de expresión en E. coli del anticuerpo monoclonal especifico anti-gliadina

SCABONE, CAMILA MARIA; VECCHI, BRUNO; PETRUCCELLI, SILVANA

Viña del Mar

Congreso; 9º Congreso Latinoamericano de Inmunología (ALAI); 2009

Sociedad Argentina de inmunologia

El anticuerpo monoclonal (mAb) 1B4E9 es específico contra gliadinas y es de utilidad en la certificación de alimentos para celìacos. El objetivo del presente trabajo fue aumentar los niveles de expresión en E. coli del anticuerpo monoclonal anti-gliadina proveniente del hibridoma 1B4E9 mediante quimerización del Fab y el clonado como scFv (single chain) en los vectores pComb3X y pMalPSS. La quimerizacion es una de las estrategias más comunes para aumentar los niveles de expresión en E. coli de Fabs fusionando los dominios variables con dominios constantes de anticuerpos con buenos niveles de expresión. La quimerización del Fab anti-gliadina se realizo utilizando OE-PCR Overlapping Extension PCR) para fusionar los dominios variables de ambas cadenas con los respectivos dominios constantes humanos. El producto final fue clonado mediante sitios Sfi I en los vectores pComb3X y pMalPSS para su expresión en superficie de fagos M13 y expresión periplásmica en E. coli, respectivamente. Se construyó además la versión simple cadena (scFv) del anticuerpo anti-gliadina, utilizando OE-PCR para fusionar las zonas variables con un linker Ser-Gly de 18 residuos de longitud. El producto final al igual que el Fab quimérico, fue clonado en los vectores pComb3X y pMalPSS. El vector pComb3X adiciona a las zonas constantes un tag de histidinas que permiten su detección utilizando anticuerpos comerciales anti-His. El vector pMalPSS provee una fusión N-terminal de MBP , que aumenta los niveles de expresión de proteína soluble. Los resultados de los inmunoensayos revelo que la mejor expresión se obtuvo con la construcción scFv en el pMalPSS.