INVESTIGADORES
PETRUCCELLI Silvana
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización in vivo e in vitro de alergenos de soja de reactividad cruzada con case¨ªnas de leche de vaca
Autor/es:
DOCENA, GUILLERMO HORACIO; CANDREVA ANGELA; CURCIARELLO, RENATA; SMALDINI, PAOLA; GONZALEZ, VIRGINIA; PARISI, GUSTAVO; PETRUCCELLI, SILVANA; FOSSATI, CARLOS ALBERTO
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXXIII Congreso Anual de la Asociación Argentina de Alergia e Inmunolog¨ªa Cl¨ªnica; 2010
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Alergia e Inmunología Clínica
Resumen:
La alergia a la leche de vaca constituye la principal alergia alimentaria en numerosas regiones del mundo. Las formulaciones a base de proteínas de soja empleadas como sustituto lácteo en niños menores de 2 años de edad son frecuentemente no toleradas, aún sin haber sido expuestos previamente a la soja. El objetivo de este trabajo fue identificar y caracterizar alergenos de soja que presentan reactividad cruzada (RC) con caseínas bovinas. Hemos identificado y clonado en E. coli a partir de una biblioteca de cDNA de semillas inmaduras de soja 4 globulinas empleando distintos vectores de expresión: A5A4B3, la subunidad α de la βconglicinina, p34 y p28. Mediante el empleo de distintos métodos inmunoenzimáticos (ELISA indirecto y de inhibición, EAST e inmunoblotting) confirmamos la RC en los 4 alergenos recombinantes. La aplicación de herramientas de bioinformática nos permitió seleccionar péptidos de 20 aminoácidos con potenciales epitopes de RC. Se obtuvieron 3 péptidos en forma recombinante (epitopes conformacionales) y por síntesis química (epitopes lineales) e identificamos secuencias conteniendo epitopes IgG e IgE de RC. El estudio por scanning de alanina permitió identificar ciertos aminoácidos críticos para la RC. La identificación de epitopes B se realizó empleando antisueros específicos de proteínas de leche, anticuerpos monoclonales anti-caseínas bovinas y sueros de individuos alérgicos a leche de vaca sin historia previa de sensibilización a soja. Estas proteínas de RC de soja fueron modeladas in silico y los epitopes seleccionados se localizaron en la superficie de las mismas, por lo cual son accesibles a los anticuerpos presentes en el medio. Finalmente se empleó un modelo murino de alergia a leche de vaca, por sensibilización intragástrica empleando toxina colérica y proteínas de leche, y se analizó la aparición de signos clínicos compatibles con una reacción de hipersensibilidad posterior al desafio oral con leche o soja. Se indujeron anticuerpos IgE e IgG1 específicos de leche bovina que reconocieron los distintos componentes de soja, se demostró la presencia de esplenocitos específicos de leche bovina que fueron estimulados in vitro con proteínas de soja, se indujo la secreción de IL-5 post-estímulo con soja o leche, y finalmente se obtuvieron pruebas cutáneas positivas por inoculación subcutánea de proteínas de leche o de soja. En conclusión, logramos expresar proteínas de soja en E. coli, estas proteínas fueron reconocidas por distintos anticuerpos específicos anti-proteínas de leche, lo cual demuestra que la RC se debe a la presencia de epitopes conservados y no de hidratos de carbono. Mapeamos epitopes IgG e IgE, detectamos posiciones aminoacídicas críticas para la RC y demostramos in vivo la alergenicidad cruzada de las mismas con proteínas de leche de vaca. Estos resultados podrían explicar la intolerancia clínica observada en pacientes alérgicos a la leche de vaca que son tratados con formulaciones a base de proteínas de soja.