Estrategias para incrementar los niveles de acumulación de transglutaminasa tisular humana (htTG) en plantas: estudio del efecto de distintas señales de direccionamiento

MARIN VIEGAS, VANESA SOLEDAD; PETRUCCELLI, SILVANA

Mar del Plata

Congreso; XXIX Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2012

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal (SAFV)

La transglutaminasa tisular humana (htTG) es una proteína de interés para el diagnóstico de la enfermedad celiaca ya que es el principal antígeno reconocido por los sueros de estos pacientes. Para diagnosticar por ensayos serológicos es necesario contar con esta proteína purificada de fuentes naturales donde se acumula a bajos niveles o recombinante cuya producción es dificultosa por su toxicidad. Las plantas constituyen un sistema económico, fácilmente escalable y seguro de síntesis de proteínas, y han mostrado ser un sistema efectivo aún para algunas proteínas toxicas, como la lipasa gástrica y la taliglucerasa alfa I. El objetivo de este trabajo fue evaluar el direccionamiento de htTG a la vía secretoria y en particular retículo endoplásmico y vacuolas, como forma de evitar los efectos tóxicos e incrementar la acumulación. Para evaluar de una manera más rápida la expresión y ajustar las condiciones para obtener la mayor acumulación, la htTG direccionada a vacuola se fusionó a un gen que codifica para la proteína reportera mCherry que fluoresce correctamente en el pH ácido de la vacuola. Se evaluó su expresión por microscopia de disección fluorescente y confocal, mostrando una localización vacuolar y de apoplasto. Los mejores niveles de expresión se obtuvieron al quinto día postinfiltración y en presencia del supresor de silenciamiento P19. Se evaluó la expresión de las construcciones dirigidas a citoplasma, apoplasto, retículo endoplásmico y vacuola, utilizando un anticuerpo monoclonal especifico de htTG y un anti-histidinas, detectándose la proteína únicamente para las construcciones de retículo endoplásmico y vacuolar.