Clostridioides difficile: relevamiento de toxinotipos circulantes en centros del sistema de salud pública. HIGA Gandulfo ? HIGA Rossi.

TREJO, F. M.; CRIVARO, A.; CARASI, P.; FRAGOMENO, M.; MINNAARD J.; SOLDAVINI, C.; HUGO A.; BENGOA A.; SALTO, I.; BENENCIA, M. E.; GODOY, A.; PÉREZ, F.; VALERO, O. M.; ARREGUI, L.; BARIDONI, M. A.; ALUL, E.; FACENTE, A.; PÉREZ, P. F.

Congreso; VII Congreso de Enfermedades Endemoepidémicas del Hospital Muñiz.; 2019

Clostridioides difficile, es un patógeno gastrointestinal esporulado, asociado al uso de antibióticos. Como factores de virulencia destacan las toxinas A (TcdA), B (TcdB) y binaria (CDTA y CDTB). Un incremento en la prevalencia y mortalidad de las infecciones por C. difficile (ICD) se asocia a cepas emergentes del ribotipo/toxinotipo 027/III multi-resistentes a antibióticos. En este sentido, se sabe poco sobre la características de las cepas de C. difficile circulantes en nuestro país. En los últimos tiempos se han detectado cepas más virulentas, que presentan variaciones de secuencia en genes tcdA, tcdB y complementarios. Estas variaciones permiten una clasificación en diferentes toxinotipos, basada en PCR-RFLP. El objetivo del trabajo fue relevar toxinotipos existentes en dos centros de salud pública locales. A partir de muestras con diagnóstico positivo para C. difficile (Htal. Gandulfo por EIA n=61, Htal. Rossi por qPCR n=38), se procedió al aislamiento y caracterización de cepas. Mediante PCR convencional se determinó la presencia del PaLoc (tox-) y de tcdA, tcdB, cdtA o cdtB empleando primers específicos. Para la toxinotipificación por RFLP, se utilizaron los primers B1 contenido en tcdB y A3 contenido en tcdA (diferentes a los empleados en la PCR convencional). Los productos fueron digeridos con Hinc y Acc para B1 y EcoRI para A3. El daño celular se evaluó mediante ensayo de citotoxicidad sobre células Vero en cultivo. Como referencia se empleó la cepa VPI 10463 (hiperproductora de toxinas, toxinotipo 0). Se obtuvieron 20 y 13 aislamientos de C. difficile toxigénico (confirmado por ensayo de citotoxicidad) provenientes del Htal. Gandulfo y Htal. Rossi respectivamente. Todos los aislamientos resultaron ser tcdA+/tcdB+, pero sólo uno que provino del Htal. Rossi también resultó ser cdtA+/cdtB+. De los resultados obtenidos por RFLP sobre aislamientos los analizados, se logró establecer el siguiente perfil de toxinotipos: 1) Htal. Rossi, [0(n=4); 0/v (n=1); III (n=1) y VIII (n=7)] 2) Htal. Gandulfo: [I(n=1); 0 (n=2) y VIII (n=17)]. En ambos centros se determinó una prevalencia de infecciones por C. difficile del 8,5%. El toxinotipo más relevante en ambos centros fue el VIII y con menor incidencia el 0. Otros toxinotipos menos relevantes fueron específicos de cada hospital. El presente trabajo constituye el primer relevamiento de toxinotipos circulantes en nuestro país.