Potencial capacidad biotransformadora de bifidobacterias sobre acenocumarol.

FRAGOMENO, M; MOBILI, P; MINNAARD, J.; PÉREZ, P. F.

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM-2019).; 2019

El acenocumarol (AC), antagonista de la vitamina K, es un anticoagulante oral muy utilizado, cuya dosificación es afectada por interacciones con alimentos u otros medicamentos, entre otros factores. Dado que la microbiota intestinal es clave en la biotransformación de drogas, son necesarios estudios con bacterias probióticas de uso alimentario para evaluar posibles efectos en individuos con tratamiento anticoagulante. El objetivo de este trabajo es evaluar in vitro el efecto de bifidobacterias de origen humano sobre el AC.Las cepas {Bifidobacterium bifidum} CIDCA 5310 ó {B adolescentis} CIDCA 5317 o sus sobrenadantes (SN) de cultivos de 24 hs, se incubaron en anaerobiosis (MRS, 37°C, 24 hs) con y sin AC. MRS con y sin AC fueron los controles. Al inicio (t0) y a las 24 hs (t24) se determinó AC en filtrados de las muestras y controles (0.22 µm) por HPLC (columna C18 5um 4,6X250mm, fase móvil 60/40 acetonitrilo/fosfórico, detector UV/Vis, espectro 250-350 nm). Se evaluaron tiempo de retención (tr) y área del pico. Además se realizó un análisis por FTIR en un espectrómetro Thermo Nicolet iS10 ATR-FTIR, depositándose 4 µL de muestra sobre una ventana de ZnSe; se registró el espectro IR en el rango 650-4000 cm^1.El análisis cromatográfico mostró que a t0 los tr del AC estuvieron alrededor de 13,4 min para todas las condiciones ensayadas (MRS, cepas o sus SN) y el área de los picos se correspondió con una concentración de AC de 0.015 mg/ml ± 0,003, compatible con la concentración agregada (0.016 mg/ml). Además, los espectros fueron coincidentes. Luego de 24 h de incubación, el control de MRS sin bacterias no presentó variaciones significativas (tr=13.90, AC=0.011 mg/ml ± 0,006) pero se observó un corrimiento del tr a 6,48 y 6,40 para los cultivos de las cepas 5310 y 5317 con áreas de pico significativamente menores (0,0046 ± 0,0002 y 0,0053 ± 0,0012, respectivamente) vs 0,0103 ± 0,0007 para t0 en ambas cepas). Cuando se utilizó una concentración de AC de 0.16 mg/ml, a t24 se observaron 3 picos cercanos a tr 6,25; 10,60 y 15,30 min para ambas cepas. El espectro del pico de tr 6,25 min fue diferente a los otros dos que fueron iguales entre sí. Controles de MRS a diferentes pH (de 4 a 7) o sobrenadantes de cultivos de 24 h con AC inicial 0,016 mg/ml, presentaron un pico a 14,10 min y área equivalente a 0.011 mg/ml ± 0,002 de AC lo cual indica la necesidad de la presencia de bacterias para que ocurra el corrimiento observado.La espectrometría FTIR de los cultivos con AC 0,16 mg/ml evidenció un pico en la zona de 1650 1/cm que se corresponde con el estiramiento del carbonilo en el grupo lactona del AC. La altura de este pico disminuyó a la mitad en los cultivos de 24 hs, respecto al valor inicial de los cultivos a t0 y a los controles de MRS AC sin inocular.Nuestros resultados indicarían que las cepas son capaces de modificar el anticoagulante in vitro lo cual podría ser relevante como variable a considerar en la dosificación del medicamento.