Clostridioides difficile: estudio sobre la germinación de aislamientos clínicos toxigénicos.

SOLDAVINI-PELICHOTTI, P. C.; TREJO, F. M.; PÉREZ, P. F.

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM-2019).; 2019

C. difficile es un patógeno anaerobio estricto esporulado que se establece y desarrolla en el colon del hospedador, causante de diarreas y colitis pseudomembranosa. Su diseminación y contagio ocurre a través de sus esporos, que al germinar por acción de componentes luminales como taurocolato de sodio (TA) y glicina (G) desencadenan la patogénesis. La germinación se caracteriza por la hidrólisis del cortex que conlleva cambios en las propiedades ópticas de los esporos y a la liberación de ácido dipicolínico (DPA). El objetivo de este trabajo fue estudiar la respuesta de esporos aislamientos clínicos de C. difficile frente a distintas condiciones de germinación.En las cepas ALCD3, GCD2 y 117 se evaluó la germinación de esporos pre-activados térmicamente (20min ? 65ºC) a diferentes temperaturas y en presencia o no de TA y G, mediante dos métodos: 1) Determinación de la cinética de descenso de DO a 600nm y 2) Determinación de la cinética de liberación de DPA (fluorescencia en presencia de TbCl3; IF). A partir de los gráficos DOt/DO0 vs t y IFt/IF0 vs t, se calcularon las velocidades VDO y VDPA expresadas como [Δ(DOt/DO0 )/Δmin] y [ΔIF/Δmin] respectivamente.Las velocidades de germinación a diferentes concentraciones de TA a 25°C fueron: a [TA]= 50 mM, VDO ALCD3 = (7,3 ± 0,1) x 10-3, VDO 117 = (3,7 ± 0,3) x 10-3 y VDOGCD2 = (1,6±0,3) x 10-3. A [TA]= 100 mM: VDOALCD3 (14 ± 1) x 10-3, significativamente mayor comparado con 117 y GCD2, cuyos valores fueron de VDO 117 = (1,7 ± 0,5) x 10-3 y VDOGCD2 (1,66 ± 0,04) x 10-3. Cuando se evaluó TA 150 mM, los valores alcanzados fueron, VDO 117 = (2,26 ± 0,04) x 10-3 y VDOGCD2 = (3,1±0,2) x 10-3. Las cepas ALCD3 y GCD2, incrementaron de manera significativa su velocidad de germinación con el aumento de TA.Mediante cinética de liberación de DPA, se evaluó, la germinación de esporos pre-activados, frente a G 100mM y distintas concentraciones de TA, a 37°C. Los valores obtenidos fueron: GCD2 (VDPA100mMTA: 1.2 x 10-2, VDPA12.5: 1.16 x 10-2, VDPA1.8mMTA: 0.681 x 10-2 , VDPA0.1mMTA: N/D) ALCD3 (VDPA100mMTA: 6 x 10-2 , VDPA12.5mMTA: 16.2 x 10-2 , VDPA1.8mMTA: 6.8 x 10-2 , VDPA0.1mMTA: 1.50 x 10-2). Mientras que GCD2 mostró un comportamiento dosis respuesta, ALCD3 presentó una concentración óptima de 10mM de TA para la germinación.Las velocidades de liberación de DPA para ALCD3 a diferentes temperaturas fueron de: VDPA25°C: 1.6 x 10-2 , VDPA30°C: 3.6 x 10-2 y VDPA37°C: 6 x 10-2. Estos resultados confirman una mayor eficiencia de la germinación cuando el proceso ocurre a 37°C. Se puede concluir que las cepas estudiadas presentan diferentes capacidades de germinar frente a inductores presentes en el lumen intestinal como el taurocolato y la glicina, siendo también la temperatura un factor determinante en la germinación. La mejor comprensión del proceso de germinación de C. difficile permitirá desarrollar estrategias enfocadas al control de las infecciones asociadas con este patógeno.