Detección de diferentes toxinotipos circulantes de Clostridium difficile en un centro de salud mediante análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP).

TREJO, F. M.; CRIVARO, A.; CARASI, P.; SALTO, I.; MAGARIÑOS, F.; ARREGUI, L. ALUL, E. FACENTE, A. Y PÉREZ, P. F.

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología. XIV Congreso Argentino de Microbiología.; 2016

Clostridium difficile(CD) es un anaerobio esporulado, responsable de 15-25 % de las diarreasasociadas al uso de antibióticos. Como factores de virulencia destacan lastoxinas A (TcdA), B (TcdB) y binaria (con dos componentes CDTA y CDTB). Losgenes que codifican TcdA y TcdB, junto con tres genes complementarios (tcdE,tcdR y tcdC), se encuentran en un locus de patogenicidad (PaLoc) cromosomal de19.6 kb. La ausencia del PaLoc caracteriza las cepas incapaces de producir TcdAy TcdB. En los últimos años se han detectado cepas con mayor virulencia que encomparación con la cepa de referencia VPI10463, presentan variaciones desecuencia en genes tcdA, tcdB y complementarios. Estas variaciones genéticaspermiten la clasificación en diferentes toxinotipos. El objetivo de estetrabajo fue determinar si existen diferentes toxinotipos de CD circulando en unmismo centro de salud público. Para ello, se evaluaron aislamientos de CDprovenientes de pacientes internados con sintomatología e historia clínicacompatible con infección por CD. Se estudiaron 6 aislamientos provenientes demateria fecal analizadas previamente mediante kits comerciales que detectantoxinas A y B o el antígeno común (glutamato deshidrogenasa) que detecta lapresencia de la bacteria. Las cepas de C. difficile provinieron de muestras quefueron positivas para al menos una de estas características.Mediante técnica de PCRconvencional con primers para los genes tcdA, tcdB, cdtA o cdtB secaracterizaron los aislamientos en estudio. Las cepas que carecen del PaLoc(tox-), muestran amplificación con primers específicos lo cual no ocurre encepas que lo contienen (potencialmente toxigénicas). Para la toxinotipificaciónpor RFLP,  se utilizaron los primers B1contenido en tcdB y A3 contenido en tcdA (diferentes a los empleados en la PCRconvencional). Los productos fueron digeridos con Hinc y Acc para B1 y EcoRIpara A3. Como referencia se empleó la cepa VPI10463 (hiperproductora detoxinas, toxinotipo 0).El análisis por PCRconvencional mostró la presencia de dos tipos de perfiles genéticos:  tcdA- /tcdB- /cdtA- / cdtB- (3 cepas) y tcdA+/ tcdB+ / cdtA- / cdtB- (3 cepas). La toxinotipificación por RFLP evidenció queen las cepas estudiadas se detectan los toxinotipos VIII y 0, II ó XIII (aún noresuelto). Se destaca también, la presencia de aislamientos tox(-) que sonreactivos con los ensayos comerciales de detección.Los resultadosdemuestran que en el ámbito del HIGA Gandulfo, circulan cepas de C. difficilecon variabilidad genética en genes de virulencia. Esto podría relacionarse conla internación de pacientes de diferentes regiones. Teniendo en cuenta queciertos toxinotipos de C. difficile se asocian a cepas hipervirulentas, unestudio que incluya más aislamientos y otros centros de salud permitirá obtenerdatos epidemiológicos sobre las infecciones por C. difficile, permitiendodetectar los principales toxinotipos circulantes y contribuir al control de laenfermedad.