Fagocitosis y destino intracelular de dos cepas del g¨¦nero Bifidobacterium en c¨¦lulas THP-1.

ASSAD, S. E.; ROLNY, I. S.; MINNAARD, J. Y PÉREZ, P. F.

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiolog¨ªa. XIV Congreso Argentino de Microbiolog¨ªa.; 2016

Las bifidobacterias son microorganismos intestinales potencialmenteprobi¨®ticos y su interacci¨®n con c¨¦lulas fagoc¨ªticas podr¨ªa ser un paso clave parael efecto inmunomodulador. Hemos demostrado que la interacci¨®n de estas bacterias conc¨¦lulas THP-1 es dependiente de la cepa evidenci¨¢ndose una mayor fagocitosis deBifidobacterium bifidum CIDCA 5310comparado con B. adolescentis CIDCA5317. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la internalizaci¨®n y eldestino intracelular de estos microorganismos en c¨¦lulas THP-1 en condicionesno ops¨®nicas.La l¨ªnea THP-1 fue diferenciada conacetato de forbol miristato por 3 d¨ªas (37¡ãC 5% de CO2). Las cepas CIDCA 5310 y CIDCA 5317 crecidasen caldo MRS suplementado con ciste¨ªna 0,05% en anaerobiosis (37¡ãC, 48hs) y marcadascon isotiocianato defluoresce¨ªna, se incubaron con c¨¦lulas THP-1 en diferentes relacionesbacterias/c¨¦lula (MDI) durante 1 h a 37¡ãC.La fagocitosis se evalu¨® mediantecitometr¨ªa de flujo luego de tratar las muestras con azul tripan paraapantallar la fluorescencia de bacterias no internalizadas y se calcul¨® el¨ªndice de fagocitosis (IF)= eventos FL1 (+) x intensidad de fluorescencia media.Para estudiar la localizaci¨®nintracelular de las bacterias se utiliz¨® MDI=10 y los compartimentos celulares semarcaron con un marcador lisosomal (Lysotracker DND-99 200 nM 5 minutos)  o con un marcador de receptores de reciclaje queno trafica por v¨ªa lisosomal (Transferrina- Alexa-594 10 ¦Ìg/ml 10 minutos). Latoma de im¨¢genes fue realizada con un microscopio confocal (LEICA TCS SP5,Leica Microscopy Systems Ltd. CH Heerbrugg, Suiza) y el an¨¢lisis decolocalizaci¨®n de bacterias en los diferentes compartimentos se realiz¨® con el softwareLeica LAS AF Lite estudi¨¢ndose al menos 200 c¨¦lulas por muestra.Los resultados mostraron un aumento delos ¨ªndices de fagocitosis en funci¨®n de la MDI. Para la cepa CIDCA 5310 losvalores de IF fueron de 655,10 ¡À 88,85 y 5195,54 ¡À 126,76 para MDI 2 y 20respectivamente mientras que para la cepa CIDCA 5317, los IF fueron de 127,38 ¡À0,82 y 1881,75 ¡À 91,49 para MDI 2 y 20 respectivamente. Respecto al destino intracelular delos microorganismos, la microscopia confocal revel¨® mayores porcentaje decolocalizaci¨®n con lisosomas para la cepa CIDCA 5310 (63.8 ¡À 0,42 %) que para la cepa CIDCA5317 (27,15 ¡À 12,79 % p< 0,05). Encontraste, ambas cepas mostraron valores bajos de colocalizaci¨®n con endosomasde reciclaje (CIDCA5310: 9.4 ¡À 1,83% y CIDCA5317: 9.5 ¡À 9,05 %).La interacci¨®n diferencial de lascepas CIDCA 5310 y CIDCA 5317 con fagocitos determina su tr¨¢fico hacia compartimentosintracelulares. A¨²n en condiciones no ops¨®nicas, las bacterias estudiadas selocalizan r¨¢pidamente en compartimentos lisosomales aunque los diferentesvalores de colocalizaci¨®n hallados sugerir¨ªan una cin¨¦tica dependiente de lacepa lo cual podr¨ªa conducir a diferentes respuestas del hospedador  frente a estos microorganismos.