Tratamiento de Clostridium difficile con sobrenadantes de bifidobacterias. Adhesión a células epiteliales Caco-2/TC7

TREJO, F. M.; MINNAARD, J.; PÉREZ, P. F. Y DE ANTONI, G. L.

Mar del Plata

Congreso; Primer Congreso Argentino de Microbiología General.; 2004

Sociedad Argentina de Microbiología General

Clostridium difficile es un bacilo Gram positivo formador de esporos. En pacientes hospitalizados es el principal responsable de los casos de diarrea asociada a antibióticos. Cuando la microflora gastrointestinal normal se ve alterada por la acción de antimicrobianos terapéuticos (vancomicina, cefalosporina clindamicina o metronidazol) dicho patógeno es capaz de colonizar el intestino. Un vez allí establecido genera dos toxinas Tox A (enterotoxina 300 kDa) y Tox B (citotoxina 270 kDa) las cuales provocan una respuesta inflamatoria y daño de la mucosa intestinal. Como consecuencia de esta patología se puede desarrollar desde un cuadro diarreico hasta una colitis pseudomembranosa fatal. es un bacilo Gram positivo formador de esporos. En pacientes hospitalizados es el principal responsable de los casos de diarrea asociada a antibióticos. Cuando la microflora gastrointestinal normal se ve alterada por la acción de antimicrobianos terapéuticos (vancomicina, cefalosporina clindamicina o metronidazol) dicho patógeno es capaz de colonizar el intestino. Un vez allí establecido genera dos toxinas Tox A (enterotoxina 300 kDa) y Tox B (citotoxina 270 kDa) las cuales provocan una respuesta inflamatoria y daño de la mucosa intestinal. Como consecuencia de esta patología se puede desarrollar desde un cuadro diarreico hasta una colitis pseudomembranosa fatal. Se ha demostrado la capacidad protectiva de las bacterias ácido lácticas en especial Lactobacillus sp. y Bifidobacterium sp., contra la acción de ciertos patógenos tales como Salmonella Typhimurium, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Clostridium perfringens y Clostridium difficile. Tanto Bifidobacterium como Clostridium difficile se alojan en la misma porción de intestino lo cual permite pensar en una acción antagónica entre ambas especies. Sin embargo es poco lo que se conoce respecto de los mecanismos a través de los cuales Bifidobacterium inhibiría la acción de Clostridium difficile. El objetivo de este trabajo consistió en detectar cepas de Bifidobacterium capaces de interaccionar con Clostridium difficile ( ATCC 9689 y ATCC 43593) de modo tal de disminuir su capacidad de adhesión a células epiteliales Caco2/TC7. Estudios anteriores permitieron seleccionar cepas de Bifidobacterium aisladas de neonatos sanos (CIDCA 531, 532, 5314, 5315, 5320,5323, 5325) cuyos sobrenadantes inhibieron el crecimiento del clostridio en el medio de cultivo. Al preincubar los sobrenadantes neutralizados de las cepas 5320, 5323, y 5325 con los clostridios, estos últimos disminuyeron la capacidad adherente a las células epiteliales. Para tratar de dilucidar la naturaleza de esta capacidad protectiva se realizaron ensayos de adhesión con sobrenadantes precalentados 10min a 100ºC. Se determinó que existen factores termolábiles involucrados en la protección contra la adhesión. Por otro lado al tratar los clostridios con radiación UV en una dosis letal, estos no variaron su capacidad adhesiva con lo cual se puede concluir que esta no depende de la viabilidad. El análisis de los sobrenadantes de las bifidobacterias a través de una electroforesis SDS-PAGE permitió determinar un perfil de proteínas cepa dependiente. Por otra parte, ensayos preliminares indican que los sobrenadantes tratados con enzimas proteolíticas poseen un menor efecto protector. Estos datos sugieren que existe un factor proteico excretado por algunas cepas de Bifidobacterium que estaría involucrado en la disminución de la capacidad adhesiva de los clostridios a enterocitos.