Efecto protector del polisacárido de kefir extraído de gránulo y producto fermentado sobre la acción toxigénica de Bacillus cereus.

14 MEDRANO, M.; PIERMARÍA, J. A.; PÉREZ, P. F. Y ABRAHAM. A. G.

La Plata

Congreso; II Congreso Argentino de Microbiología General; 2005

Sociedad Argentina de Microbiología General

El kefiran es un exopolisacárido producido por los gránulos de kefir o por microorganismos aislados de éstos. Es un glucogalactano ramificado, hidrosoluble, compuesto por glucosa y galactosa. Es liberado al medio de cultivo (leche o suero), pero la mayor parte queda retenida en los gránulos, siendo ésta la fuente de obtención más abundante. Por otro lado, Bacillus cereus es un microorganismo gram (+), esporulado, contaminante frecuente en alimentos, capaz de producir en el hombre dos tipos de síndrome: emético y diarreico. La virulencia de este microorganismo está asociada a su capacidad de producir diversos factores exocelulares, y probablemente también a la capacidad de los bacilos de adherirse a las células del epitelio intestinal. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la capacidad del kefiran aislado a partir de suero fermentado y de gránulo, de disminuir el daño provocado por los factores exocelulares presentes en sobrenadantes de cultivo de B.cereus. El kefiran se purificó mediante precipitación con etanol helado, centrifugación, resuspensión en agua bidestilada y diálisis. Se trabajó con sobrenadantes de cultivo libres de células de las cepas M2 y B10502 de B.cereus (cátedra de Microbiología de la Facultad de Ciencias Exactas, UNLP), crecidas en BHI durante 16 h., a 32° C en agitación. Para evaluar la capacidad de los bacilos de adherirse al epitelio intestinal, se trabajó con suspensiones celulares en PBS, de cultivos de 3 h., adicionados con gentamicina al 0.1%, y llevados a OD=1. Se estudió el efecto de los sobrenadantes y de los bacilos, en presencia y ausencia de kefiran, en células de epitelio intestinal de la línea Caco-2, evaluando viabilidad celular mediante tinción de núcleos necróticos con ioduro de propidio y medición de actividad mitocondrial mediante el método del MTT. Se midió el desprendimiento de las células al sustrato mediante tinción con cristal violeta. Se cuantificó el porcentaje de hemólisis a diferentes tiempos de incubación. Finalmente, se evaluó la adhesión del bacilo a las células intestinales mediante observación en microscopio electrónico de barrido. Los sobrenadantes causaron necrosis en las células Caco-2. En presencia de kefiran de gránulo este efecto se vio disminuido. Los sobrenadantes causaron en las células Caco-2 disminución de la actividad mitocondrial, y el agregado de kefiran de suero en concentración de 765 mg/L produjo un efecto protector para todas las concentraciones de factores exocelulares ensayados. La presencia de EPS de granulo disminuyó el porcentaje de desprendimiento de las células al sustrato. Los bacilos de la cepa B10502 mostraron capacidad de adherirse a las células Caco-2. La presencia de kefiran de gránulo disminuyó notablemente este efecto. Los sobrenadantes causaron lisis en eritrocitos, la presencia de kefiran tanto de suero como de gránulo disminuyó el porcentaje de hemólisis. Este efecto no se observó cuando se ensayaron dextranos del mismo peso molecular como control. De acuerdo a los resultados observados, puede concluirse que este exopolisacárido, tanto de suero como de gránulo, presenta la capacidad de disminuir los efectos citotóxicos causados por los sobrenadantes de cultivo de B.cereus