INVESTIGADORES
PEREZ Pablo Fernando
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de la incorporación de complejos polímero-liposoma en células epiteliales humanas.
Autor/es:
SZYMANOWSKI, F.; HUGO, A.A.; ALVES, P.; GÓMEZ ZAVAGLIA, A. Y PÉREZ, P. F.
Reunión:
Simposio; X Simposio Nacional de Biotecnología; 2015
Resumen:
Los liposomas presentan características biológicas (biocompatibilidad, biodegradabilidad y baja toxicidad) que los convierten en óptimos sistemas para la administración de drogas. En estos sistemas, debe prestarse atención a la llegada en forma activa del compuesto transportado al sitio blanco. Desde la perspectiva celular existen numerosas barreras biológicas que pueden dificultar este recorrido. Los mayores obstáculos que los sistemas liposomales deben superar incluyen: la unión a la superficie celular, el transporte a través de la membrana plasmática y la degradación lisosomal. Es sabido que los mecanismos de incorporación celular de macromoléculas están muy relacionados con el tráfico intracelular y el destino final de éstas moléculas. Una excelente estrategia para mejorar la eficiencia de llegada de la droga transportada al sitio blanco es utilizar ciertas vías de entrada celular que evitan o minimizan la degradación temprana del compuesto. En el presente trabajo se evaluó la incorporación de complejos polímero liposoma (PLCs) de lecitina y colesterol PDMAEMA (poli- N,N-dimetilaminoetil metacrilato) a células epiteliales; determinando a través del empleo de inhibidores las posibles vías de ingreso. Los liposomas multilamelares se prepararon mediante el método de evaporación reversa con la incorporación de 10% en relación molar de CHO-PDMAEMA. Los films polímero lecitina fueron hidratados con 60 mM de calceína en buffer hepes para obtener liposomas marcados. Se utilizaron las líneas celulares epiteliales humanas Caco- TC7 y Hek. La internalización de los PLCs se evaluó mediante microscopia confocal y citometría de flujo.El porcentaje de incorporación de los PLCs fue muy alto en ambas líneas epiteliales con valores superiores al 80% de células marcadas con calceína. Gran parte de la marca de los liposomas se observó en compartimentos intracelulares sugiriendo un ingreso de los mismos a través de una vía endocítica. Los agentes secuestrantes de colesterol (nistatina y metil beta ciclodextrina) junto con la genisteína (inhibidor de tirosín quinasas) fueron los que mostraron un mayor efecto antagónico sobre la incorporación de los PLCs. El efecto conjunto de estos inhibidores sugiere la utilización de la endocitocis mediada por caveolas como mecanismo de internalización de los PLCs. Los resultados obtenidos evidenciaron una eficiente incorporación de los PLCs a la vía endocítica caveolar de células epiteliales. Esta vía de internalización celular evita la degradación lisosomal constituyendo una ventaja en el uso potencial de los PLCs bajo estudio como sistemas para la vehiculización de compuestos bioactivos.