INVESTIGADORES
PEREZ Pablo Fernando
congresos y reuniones científicas
Título:
Interacción entre Bacillus cereus y enterocitos: factores relevantes y vías de señalización.
Autor/es:
MINNAARD, J., I. S. ROLNY Y P. F. PÉREZ
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología. X Congreso Argentino de Microbiología.; 2004
Resumen:
Bacillus cereus posee la capacidad de interaccionar con enterocitos humanos en cultivo. Esta interacción conduce a una desorganización de la red de actina y a fenómenos de necrosis en las células eucarióticas. Los objetivos del presente trabajo fueron el estudio de los factores que influyen en la interacción directa entre Bacillus cereus y enterocitos así como también las vías de señalización involucradas. Las bacterias se cultivaron en BHI- 0.1 % glucosa durante 3 h a 32°C con agitación. Se utilizaron enterocitos humanos (Caco-2, medio DMEM) que fueron incubados con diferentes cepas de Bacillus cereus (108 ufc/ml) en medio DMEM con cloranfenicol (2 h a 37°C). Los tratamientos empleados sobre las bacterias fueron: calentamiento, tripsina, irradiación con UV, lavado, metaperyodato y extracción con LiCl. También se estudió el efecto de la edad de los enterocitos, factores exocelulares bacterianos y calcio. Para evaluar la importancia de diferentes vías de señalización se emplearon inhibidores específicos: genisteína (Tyr quinasas), staurosporina (Ser/Thr quinasas), calfostina (protein quinasa C), wortmanina (fosfoinositol 3 fosfato quinasa, PI3K), U73122 (fosfolipasa C) y dantrolene (movilización de calcio). La adhesión se determinó por recuento microscópico de frotis coloreados o por recuento en placa. La invasión se evaluó mediante el ensayo de protección con gentamicina. Los resultados mostraron que en la interacción Bacillus cereus-enterocito intervienen factores proteicos y glucídicos y que la viabilidad es necesaria para la adhesión. Este efecto fue cepa-dependiente. También se encontraron mayores valores de adhesión e invasión cuando se utilizaron enterocitos no diferenciados así como una participación de factores exocelulares bacterianos no específicos de cepa. Los experimentos en medios de cultivo sin calcio o con quelantes específicos de este ión (EGTA), mostraron un aumento en la invasión en ausencia de calcio. De los inhibidores ensayados, los relacionados con las vías de los lípidos fosforilados produjeron una significativa disminución de la invasión. Nuestros resultados demuestran el carácter multifactorial de la interacción entre Bacillus cereus y enterocitos humanos y sugieren la importancia de la región basolateral para la invasión de las monocapas celulares. En el plano de la transducción de señales, se evidencia la importancia de las vías que involucran lípidos fosforilados (en especial PI3K) en los eventos relacionados con la invasión. El presente trabajo pone en evidencia aspectos que aún no habían sido explorados con relación a la virulencia de Bacillus cereus en el contexto de las infecciones intestinales. posee la capacidad de interaccionar con enterocitos humanos en cultivo. Esta interacción conduce a una desorganización de la red de actina y a fenómenos de necrosis en las células eucarióticas. Los objetivos del presente trabajo fueron el estudio de los factores que influyen en la interacción directa entre Bacillus cereus y enterocitos así como también las vías de señalización involucradas. Las bacterias se cultivaron en BHI- 0.1 % glucosa durante 3 h a 32°C con agitación. Se utilizaron enterocitos humanos (Caco-2, medio DMEM) que fueron incubados con diferentes cepas de Bacillus cereus (108 ufc/ml) en medio DMEM con cloranfenicol (2 h a 37°C). Los tratamientos empleados sobre las bacterias fueron: calentamiento, tripsina, irradiación con UV, lavado, metaperyodato y extracción con LiCl. También se estudió el efecto de la edad de los enterocitos, factores exocelulares bacterianos y calcio. Para evaluar la importancia de diferentes vías de señalización se emplearon inhibidores específicos: genisteína (Tyr quinasas), staurosporina (Ser/Thr quinasas), calfostina (protein quinasa C), wortmanina (fosfoinositol 3 fosfato quinasa, PI3K), U73122 (fosfolipasa C) y dantrolene (movilización de calcio). La adhesión se determinó por recuento microscópico de frotis coloreados o por recuento en placa. La invasión se evaluó mediante el ensayo de protección con gentamicina. Los resultados mostraron que en la interacción Bacillus cereus-enterocito intervienen factores proteicos y glucídicos y que la viabilidad es necesaria para la adhesión. Este efecto fue cepa-dependiente. También se encontraron mayores valores de adhesión e invasión cuando se utilizaron enterocitos no diferenciados así como una participación de factores exocelulares bacterianos no específicos de cepa. Los experimentos en medios de cultivo sin calcio o con quelantes específicos de este ión (EGTA), mostraron un aumento en la invasión en ausencia de calcio. De los inhibidores ensayados, los relacionados con las vías de los lípidos fosforilados produjeron una significativa disminución de la invasión. Nuestros resultados demuestran el carácter multifactorial de la interacción entre Bacillus cereus y enterocitos humanos y sugieren la importancia de la región basolateral para la invasión de las monocapas celulares. En el plano de la transducción de señales, se evidencia la importancia de las vías que involucran lípidos fosforilados (en especial PI3K) en los eventos relacionados con la invasión. El presente trabajo pone en evidencia aspectos que aún no habían sido explorados con relación a la virulencia de Bacillus cereus en el contexto de las infecciones intestinales.