Inhibición de la adhesión de Clostridium difficile por sobrenadantes de Bifidobacterium.

TREJO, F. M.; MINNAARD, J.; PÉREZ, P. F.; DE ANTONI, G. L.

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología. X Congreso Argentino de Microbiología.; 2005

Clostridium difficile, bacilo Gram positivo formador de esporos, es el principal responsable de los casos de diarrea asociada a antibióticos (AAD). Dicho patógeno es capaz de colonizar el tracto gastrointestinal en pacientes hospitalizados cuya flora normal ha sido alterada por efecto de la terapia con antibióticos tales como vancomicina, cefalosporina o metronidazol. C. difficile se adhiere al epitelio intestinal y una vez establecido produce una enterotoxina (Tox A) y una citotoxina (Tox B) capaces de inducir desde una colitis leve hasta una colitis pseudomembranosa. Se ha descrito el uso de agentes probióticos para el tratamiento de la AAD, entre ellos se han estudiado Saccharomyces boulardii, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus GG, Bifidobacterium longum y Enterococcus faecium SF68. Sin embargo, aún no se han dilucidado los mecanismos de la acción terapéutica. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de las bifidobacterias en la adhesión de C. difficile a enterocitos in vitro. Estudios anteriores permitieron identificar cepas de Bifidobacterium (CIDCA 531, 532, 5320 y 5323 entre otras) con capacidad de inhibir el crecimiento de Clostridium difficile en medio de cultivo. A partir de estos resultados se estudió la propiedad de bifidobacterias, de origen humano de disminuir la adhesión de Clostridium difficile ATCC 9689 y 43593 a células Caco-2 /TC7. Para los ensayos de adhesión se emplearon suspensiones de clostridios en sobrenadantes de bifidobacterias neutralizados y filtrados preincubados 1hs a 37ºC. Posteriormente dichas suspensiones se incubaron 3hs sobre los enterocitos a 37ºC en atmosfera de CO2. La adhesión se cuantificó microscópicamente mediante la técnica de Breed. Asimismo, se estudió la acción de sobrenadantes de bifidobacterias sometidos a calentamiento a 100 ºC durante 10 min e incubación con proteasas. Algunos sobrenadantes de bifidobacterias inhibieron la adhesión de clostridios a células Caco-2/TC7. Este efecto disminuyó con el calentamiento indicando la presencia de un factor termolábil. En los sobrenadantes de bifidobacterias libres de bacterias se detectó la presencia de polipéptidos (SDS-PAGE) con un peso molecular aparente entre 96 kDa y 43 kDa. El tratamiento con proteinasa-K disminuyó la capacidad de la cepa CIDCA 5323 de inhibir la adhesión de Clostridium difficile. Por otra parte, se determinó que la viabilidad de Clostridium difficile no es un factor determinante en la adhesión. Los resultados obtenidos indican que algunas cepas de bifidobacterias producen polipéptidos extracelulares con capacidad de disminuir la adhesión de Clostridium difficile a enterocitos in vitro. , bacilo Gram positivo formador de esporos, es el principal responsable de los casos de diarrea asociada a antibióticos (AAD). Dicho patógeno es capaz de colonizar el tracto gastrointestinal en pacientes hospitalizados cuya flora normal ha sido alterada por efecto de la terapia con antibióticos tales como vancomicina, cefalosporina o metronidazol. C. difficile se adhiere al epitelio intestinal y una vez establecido produce una enterotoxina (Tox A) y una citotoxina (Tox B) capaces de inducir desde una colitis leve hasta una colitis pseudomembranosa. Se ha descrito el uso de agentes probióticos para el tratamiento de la AAD, entre ellos se han estudiado Saccharomyces boulardii, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus GG, Bifidobacterium longum y Enterococcus faecium SF68. Sin embargo, aún no se han dilucidado los mecanismos de la acción terapéutica. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de las bifidobacterias en la adhesión de C. difficile a enterocitos in vitro. Estudios anteriores permitieron identificar cepas de Bifidobacterium (CIDCA 531, 532, 5320 y 5323 entre otras) con capacidad de inhibir el crecimiento de Clostridium difficile en medio de cultivo. A partir de estos resultados se estudió la propiedad de bifidobacterias, de origen humano de disminuir la adhesión de Clostridium difficile ATCC 9689 y 43593 a células Caco-2 /TC7. Para los ensayos de adhesión se emplearon suspensiones de clostridios en sobrenadantes de bifidobacterias neutralizados y filtrados preincubados 1hs a 37ºC. Posteriormente dichas suspensiones se incubaron 3hs sobre los enterocitos a 37ºC en atmosfera de CO2. La adhesión se cuantificó microscópicamente mediante la técnica de Breed. Asimismo, se estudió la acción de sobrenadantes de bifidobacterias sometidos a calentamiento a 100 ºC durante 10 min e incubación con proteasas. Algunos sobrenadantes de bifidobacterias inhibieron la adhesión de clostridios a células Caco-2/TC7. Este efecto disminuyó con el calentamiento indicando la presencia de un factor termolábil. En los sobrenadantes de bifidobacterias libres de bacterias se detectó la presencia de polipéptidos (SDS-PAGE) con un peso molecular aparente entre 96 kDa y 43 kDa. El tratamiento con proteinasa-K disminuyó la capacidad de la cepa CIDCA 5323 de inhibir la adhesión de Clostridium difficile. Por otra parte, se determinó que la viabilidad de Clostridium difficile no es un factor determinante en la adhesión. Los resultados obtenidos indican que algunas cepas de bifidobacterias producen polipéptidos extracelulares con capacidad de disminuir la adhesión de Clostridium difficile a enterocitos in vitro.