Evaluación del efecto citopático en aislamientos de Bacillus megaterium provenientes de miel.

LÓPEZ, A.C.; MINNAARD, J.; PÉREZ, P. F. Y ALIPPI, A.M.

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología.; 2010

La calidad de la miel esta influenciada por la presencia de microorganismos que afectan sus características. El efecto combinado derivado de las propiedades naturales antimicrobianas de la miel más la adopción de prácticas higiénicas de procesamiento resulta generalmente en un producto apto para el consumo humano directo, con bajos niveles de contaminación microbiana. Las bacterias del género Bacillus son las especies esporuladas introducidas en la miel por las abejas con mayor frecuencia. Dentro de este grupo, Bacillus megaterium ha sido citado como productor de amilasas, proteasas, citoquinasas, y compuestos con actividad bactericida y se encuentra en diversos hábitats  tales como suelo, agua marina, arroz, pescado, miel y alimentos secos. Dado que a través del consumo de miel se podrían ingerir estas bacterias y/o sus productos metabólicos, se planteó estudiar el efecto citopático  sobre enterocitos humanos en cultivo (línea Caco-2) de cepas  de B. megaterium aisladas de miel. Para ello se utilizaron células Caco-2 cultivadas durante 15 días a 37ºC en 5% de CO2 en medio DMEM suplementado con 10 % de suero fetal bovino en placas de 24 fosas. El desprendimiento se evaluó, mediante tinción con cristal violeta de las células remanentes luego de la incubación de las monocapas con los sobrenadantes de cultivo previamente filtrados. Asimismo, se infectaron las monocapas con suspensiones bacterianas en ausencia de sobrenadantes. Los resultados se  analizaron utilizando el test de Student. Se evaluaron  los sobrenadantes de 50 cepas de B. megaterium de los cuales 9 (18%) desprendieron el 100% de la monocapa de  enterocitos y 4 (8%) desprendieron menos de la mitad de la monocapa;  el resto de las cepas no produjeron alteración de la misma. Con las cepas que provocaron el mayor desprendimiento se evaluó la dosis respuesta (dosis de sobrenadante vs porcentaje de desprendimiento) observándose una respuesta asintótica en la mayoría de los casos.. En la mayoría de los casos, se observó una alta dependencia del efecto biológico con la concentración. La infección de las monocapas dio como resultado que una cepa desprendió la totalidad de la monocapa para cultivos de 3 hs de desarrollo y ninguna cepa desprendió los enterocitos para cultivos de 16 hs de desarrollo. También se evaluó el título de hemólisis de glóbulos rojos de origen animal con los sobrenadantes filtrados incubando 2 hs a 37ºC y 16 hs a 4ºC. El título varió desde 4 hasta 16 luego de la incubación a 37ºC. Todos los títulos aumentaron una dilución luego de la incubación a 4ºC. Los resultados demuestran que los factores extracelulares de B. megaterium poseen efecto citopático, así como las bacterias en estado vegetativo (aunque en menor proporción). Este es el primer trabajo donde se estudió el efecto citopático sobre enterocitos en cultivo de este microorganismo.