Lactobacillus delbrueckii susp. lactis (strain CIDCA 133) incrementa la capacidad fagocítica y de destrucción de los macrófagos humanos contra enteropatógenos causantes de lesión attaching /effacing

HUGO, A. A. Y PÉREZ, P. F.

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología.; 2010

INTRODUCCIÓN: Una de las funciones esenciales de los de los monocitos y macrófagos es su capacidad de endocitar bacterias y posteriormente inactivarlas, constituyendo así una de las primeras líneas de defensa en la inmunidad innata. Las bacterias ácido lácticas (BAL) han sido ampliamente utilizadas como probióticos debido a sus efectos benéficos sobre la salud del hospedador entre los que se encuentran la activación de macrófagos y linfocitos. OBJETIVOS: En el presente trabajo se evaluó la capacidad fagocítica y bactericida de sobre patógenos causantes de lesión attaching/effacing (A/E) de la línea celular de monocitos macrófagos U-937 en presencia de la cepa probiótica Lactobacillus delbrueckii susp. lactis (CIDCA 133). MATERIALES Y MÉTODOS: Las células U-937 se cultivaron a 37ºC en atmósfera enriquecida con 5% de CO2 en medio RPMI suplementado con 10% (v/v) de suero fetal bovino, estreptomicina y penicilina. La diferenciación celular se obtuvo por el añadido de dimetilsulfóxido al 1%. Lactobacillus delbrueckii susp. Lactis (cepa CIDCA 133) se creció en medio MRS a 370C en condiciones anaeróbicas. Los sobrenadantes de cultivo, neutralizados a pH 7 con NaOH, se filtraron a través de una membrana de 0,45 μm.  E. coli EHEC cepa 69160 y C. rodentium ICC 180 fueron crecidos en medio LB a 370C con agitación. Los microorganismos Gram negativos fueron marcados con isotiocianato de fluoresceína (0.3 mg/ml) y opsonizados mediante su incubación en RPMI con 10% de suero humano. El lactobacilo fue marcado con succinimidil ester de acetato de carboxifluoresceína (10 ug/ml). En los ensayos de fagocitosis los microorganismos y las células eucarióticas fueron suspendidos en medio RPMI con una multiplicidad de infección de 20:1 bacteria-célula e incubados a 37ºC durante 30 min.  Luego las células fueron lavadas con PBS helado a fin de detener la fagocitosis.  Las bacterias internalizadas totales se determinaron mediante citometría de flujo. La fluorescencia externa de las bacterias asociadas se apantalló mediante la adición de azul Tripán al 2% v/v. Las bacterias internalizadas sobrevivientes se evaluaron mediante recuento de microorganismos viables previa incubación con RPMI gentamicina (100ug/ml) para matar bacterias no internalizadas y lisis celular. RESULTADOS: En presencia del lactobacilo la internalización de E. coli  EHEC y C. rodentium fue significativamente mayor tanto para las células U-937 diferenciadas como no diferenciadas. La supervivencia intracelular de los enteropatógenos A/E disminuyó entre 2 y tres veces en las células diferenciadas que fueron coincubadas con el la cepa CIDCA 133. Los sobrenadantes del lactobacilo no modificaron el índice de fagocitosis de los microorganismos ensayados. Para la cepa CIDCA 133 se obtuvieron índices de internalización relativamente bajos, los cuales no se vieron modificados en la presencia de las bacterias Gram negativas.   CONCLUSIONES: Los resultados demuestran que el Lactobacillus delbrueckii susp. lactis (cepa CIDCA 133) es capaz de incrementar la internalización y eliminación de enteropatógenos A/E en estudio por parte de los macrófagos.