CARACTERIZACIÓN GENO-FENOTÍPICA DE Escherichia coli VEROCITOTOXIGÉNICA (VTEC) Y SU PERSISTENCIA EN MEDIO AMBIENTE DE TAMBO

ROSANA POLIFRONI; ANALÍA I. ETCHEVERRÍA; NORA L. PADOLA

Tandil

Jornada; Primeras Jornadas de Difusión de Proyectos Doctorales; 2010

Fac. Cs. Veterinarias, UNCPBA

CARACTERIZACIÓN GENO-FENOTÍPICA DE Escherichia coli VEROCITOTOXIGÉNICA (VTEC) Y SU PERSISTENCIA EN MEDIO AMBIENTE DE TAMBO Polifroni R., Etcheverría A. y Padola N.L. Argentina presenta el mayor número de casos de SUH a nivel mundial. Los bovinos son el principal reservorio de Escherichia coli verocitotoxigénico (VTEC) y los rodeos argentinos presentan una alta prevalencia de este patógeno. A pesar de esto, VTEC se aísla del medio ambiente con baja frecuencia. Una posible explicación sería la capacidad de VTEC de formar biofilms y/o entrar en un estado fisiológico de no culturabilidad (VBNC), permitiéndoles escapar a la detección por medios microbiológicos tradicionales y haciendo imprescindible el uso de técnicas moleculares. Determinar la capacidad para formar biofilms y estudiar la persistencia de VTEC en agua de bebederos, son algunos de los objetivos de esta tesis doctoral. Se analizaron muestras de materia fecal, agua y sedimento de bebederos, alimentos de animales, suelo de corrales, leche e hisopados de baldes de alimentación y pezoneras, de un tambo. Las muestras VTEC positivas se obtuvieron a través de la búsqueda de los genes de las verocitotoxinas por PCR en zonas confluentes. Las colonias se aislaron en placas de agar Mac Conkey y se determinaron sus perfiles de virulencia mediante PCR múltiplex. En total se han analizado 236 muestras con una prevalencia de VTEC del 25,85%. Se buscaron los genes implicados en la síntesis de la fimbria curli que participa en la formación de biofilm de VTEC (csgA, csgD y crl) y se estudió su expresión en placas de agar rojo Congo (RC). También se realizó la búsqueda del gen de la proteína Sab (sab), que contribuye a la adherencia difusa en células HEp-2 y promueve la formación de biofilm en placas de poliestireno. Todas las cepas VTEC presentan los genes para curli y sólo algunas el sab. Por otro lado, sólo las cepas aisladas de superficies sólidas expresaron curli en el medio RC. Posteriormente, se utilizó la técnica de producción del biofilm sobre placa de microtitulación, cuyos resultados corroboraron los obtenidos con la siembra en RC. Esto indicaría que VTEC podría variar su fenotipo en respuesta a las condiciones del ambiente y a la superficie donde se encuentra. La capacidad de supervivencia de VTEC en agua se ensayó en dos oportunidades con agua de bebederos estéril e inoculada con dos cepas VTEC (una O157 y otra no-O157) aisladas de bovinos y resistentes a ácido nalidíxico (NAL). Las colonias en SMAC – NAL (sin enriquecimiento previo) se recuperaron hasta el día 75, mientras con enriquecimiento y PCR se detectaron sus genes hasta el día 92.