Detección del gen sab y su asociación con la formación de biofilm en cepas VTEC de medioambiente de tambo y animales.

ROSANA POLIFRONI; DANIEL FERNÁNDEZ; MÓNICA Z. ALONSO; ANALÍA I. ETCHEVERRÍA; NORA L. PADOLA; ALBERTO E. PARMA

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Detección del gen sab y su asociación con la formación de biofilm en cepas VTEC de medioambiente de tambo y animales. R. Polifroni 1,2, D. Fernández 1,2, M. Z. Alonso 1, 2, A. I. Etcheverría 1,3, N. L. Padola 1,3 y A. E. Parma 1,3. Laboratorio de Inmunoquímica y Biotecnología. FCV. UNCPBA Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Comisión de Investigaciones Científicas. Sab es una nueva adhesina que contribuye a la formación de biofilm que pertenece a una familia de proteínas de superficie que se ha encontrado en cepas de Escherichia coli enterohemorrágicas (EHEC) del serotipo O113:H21. Sab se une a la superficie de células epiteliales humanas (HEp-2). También se ha descripto que su presencia favorece la formación de biofilm de cepas de O113:H21 en placas de poliestireno. El gen sab se encuentra en el megaplásmido de EHEC carentes de locus de borrado del enterosito (LEE), por lo que comparte ubicación con los genes ehxA, saa y subA. Sin embargo, no se ha encontrado que las cepas que poseen el megaplásmido sean portadoras del gen sab. En el presente ensayo hemos seleccionado 6 aislamientos de Escherichia coli verocitotoxigénicas (VTEC) obtenidas de superficies sólidas del ambiente de tambo y portadoras del megaplásmido: una cepa O116:NM (ehxA, vt2, saa) y 5 cepas O26:H21 (ehxA, eae, vt1). También se analizaron 4 cepas procedentes de animales: una cepa de O113:H21 (ehxA, vt2, vt1, saa), una cepa O113:H? (ehxA, vt2, saa), una cepa O178:H? (ehxA, vt2, saa) y otra O178:H19 (ehxA , vt2, vt1, saa). Se utilizó una cepa O157:H7 (ehxA, eae, vt2) aislada de bovinos como control negativo de sab y O20:H19 (ehxA, vt2, vt1, saa, sab) como control positivo. A todas las muestras se les realizó una PCR monoplex para la identificación de la presencia del gen sab y de los genes crl, csgD y csgA implicados en la síntesis de fimbria curli. Paralelamente, se realizó la producción de biofilm en placas de poliestireno (cada muestra por cuadruplicado) y la feno-caracterización en placas de Rojo Congo (RC). El fenotipo rdar (colonias rojas y rugosas) indica la síntesis de fimbria curli y celulosa y la capacidad de formar biofilm, mientras que los fenotipos saw (colonias blancas y lisas) y sar (colonias rojas y lisas) indica la no síntesis de ambos productos o sólo de la fimbria, y por lo tanto la incapacidad de formar biofilm. Sólo la cepa O178:NM posee el gen sab y presentó la mayor capacidad de formar biofilm, con un valor promedio de absorbancia a 570 nm de 0,83 (DO570), mientras que la cepa O20:H19 presentó un valor de DO570 0,49. Las restantes cepas y aislamientos tuvieron valores de DO570 sin diferencias significativas. Todas las cepas y aislamientos analizados poseen los genes necesarios para le expresión de la fimbria curli, pero no todas presentaron el mismo fenotipo en RC. La cepa O157:H7 presentó fenotipo saw mientras que las muestras aisladas del ambiente de tambo fueron rdar y las cepas aisladas de animales presentaron un fenotipo intermedio sar. Conclusión: la presencia del gen sab se no se encuentra relacionada con la capacidad de formar biofilm de cepas analizadas de VTEC procedentes del ambiente y de animales.