CESIMAR - CENPAT   25625
CENTRO PARA EL ESTUDIO DE SISTEMAS MARINOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Efecto de la purificación de Alginato sobre la biocompatibilidad y viabilidad celular
Autor/es:
TORRES, MARÍA LUZ; DELLATORRE, FERNÁNDO GASPAR; CORTIZO, ANA MARÍA; OBERTI, TAMARA; FERNÁNDEZ, JUAN MANUEL
Lugar:
La Plata
Reunión:
Workshop; Workshop Iberoamericano sobre Biomateriales para Aplicaciones Médicas; 2017
Institución organizadora:
CONICET - UNLP
Resumen:
El alginato es un polisacárido soluble en agua obtenido de algas marinas y bacterias. Es un copolímero lineal y natural constituido de residuos de β-D-ácido manurónico(M) and α-L-ácido gulurónico(G) (1→4) (1). Debido a su buena biocompatibilidad, baja toxicidad y capacidad para formar hidrogeles; es utilizado en una gran variedad de aplicaciones biomédicas como liberación de drogas o en ingeniería de tejido (2). Sin embargo, este tipo de disciplinas requiere la utilización de materiales altamente purificados ya que la presencia de monómeros residuales o impurezas afecta en gran medida la viabilidad celular. La extracción de alginato, tanto a nivel laboratorio como industrial, es un proceso muy grosero y, por lo tanto, el producto puede tener un gran número de impurezas, principalmente proteínas y polifenoles, que deriven en una intensa reacción inmune y una disminución de la biocompatibilidad del material (3).En el presente trabajo comparamos el alginato de sodio comercial (AC, Sigma Aldrige) y aquéllos extraídos del alga U. pinnatifida (nativa del noroeste de Asia (Japón, China y Korea) que ha invadido las costas de la Patagonia Argentina (4)) proveniente de dos fuentes anatómicas distintas: nervadura (MB) y lámina (MV), con el producto final conseguido de cada uno luego del proceso de purificación (ACP, MBP, MVP). Este método consiste en una extracción con solvente orgánico, en este caso una mezcla de cloroformo y butanol, seguido de una posterior precipitación en etanol llevado a pH=8 con Na2CO3. La caracterización de las muestras antes y luego de purificarlas fue realizada mediante FTIR, TGA y medidas de viscosidad intrínseca utilizando agua como solvente. Estas técnicas demostraron que el proceso de purificación no afecta la estructura química ni el comportamiento térmico del polímero. Además, en los termogramas, observamos que las muestras purificadas presentaron menos eventos de degradación térmica que las no purificadas, lo cual puede deberse a la eliminación de impurezas en el proceso de purificación. Con el fin de analizar la citotoxicidad del material, se realizaron ensayos de citotoxicidad y viabilidad celular con macrófagos murinos RAW 264.7 evaluando la producción óxido nítrico (NO) y la actividad metabólica por reducción de la sal de tetrazolio, bromuro de 3-(4,5- dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol (MTT), durante 48hs para cada una de las muestras obtenidas. Se estudió la biocompatibilidad del material cultivando Células Progenitoras de Médula Ósea (CPMO) en medio osteogénico con todas las muestras de alginato durante 14 días. La evaluación se realizó al medir la actividad de la enzima Fosfatasa Alcalina (FAL) y la producción de Colágeno Tipo 1 (Colt1) como parámetros de diferenciación osteogénica. Los resultados mostraron que, para todos los casos, las muestras sin purificar generaron una disminución de la viabilidad celular (p