Nanoantcuerpos contra la proteína HA del Virus de Influenza A H1N1 con capacidad neutralizante

BARBIERI, E.S.; WIGDOROVITZ, A.; BAZTARRICA, J.; GARAICOECHEA, L.L.; PUNTEL, M.; SOSA HOLT, C; BAUMEISTER, E.; PARREÑO, V.

CABA

Jornada; XXXVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología (SAV); 2016

Sociedad Argentina de Microbiología

La inmunidad pasiva ha sido históricamente una estrategia de elección en la lucha contra infecciones con virus influenza. A pesar de que muchas cepas de virus influenza no replican o causan enfermedad en ratones algunas cepas virus de influenza humanos han sido adaptados al ratón a través de pasaje seriado. El modelo ratón resulta una herramienta atractva y útl para el estudio de la efcacia de tratamientos antvirales y vacunas contra influenza entre otros agentes. Nuestro grupo ha informado anteriormente el desarrollo de nanoantcuerpos (VHH) específcos contra la proteína HA0 de la cepa H1N1. Se observó que 5 de los 37 antcuerpos que demostraron especifcidad para H1N1 poseen actvidad neutralizante in vitro frente a la cepa H1N1 A/Argentna/017/2009. Por otro lado, el clon G41.2 inhibe la hemoaglutnación por esta misma cepa. Tanto el clon G41.2 como el clon E13.2 demostraron tener actvidad neutralizante <in vitro> con muy alta afnidad: 0.025ng/pocillo fueron sufcientes para mostrar actvidad neutralizante del virus sobre monocapas celulares de MDCK, versus 1.5 o 3ng necesarios para obtener el mismo resultado con otros clones.En el presente trabajo presentamos la capacidad neutralizante observada <in vivo> de los clones G41.2 y E13-2. Brevemente, se realizó un ensayo de protección profláctca realizado en el modelo ratón donde los VHHs fueron administrados por vía intranasal (100ug en 50ul de PBS). Como control negatvo se utlizó un VHH no relacionado. Como control positvo se utlizó suero de ratón inmunizado con la cepa de desafo H1N1 A/Argentna/017/2009, de acuerdo a la dilución estpulada como neutralizante mediante ensayos realizados <in vitro>.La capacidad neutralizante frente a la infección viral otorgada por cada tratamiento fue evaluada a punto fnal: 4 días post-tratamiento y desafo. Se analizó el ttulo viral infeccioso obtenido a partr del lisado de tejido pulmonar de los ratones analizados, sobre células MDCK y revelado por ELISA con un suero policlonal de cobayo A/Argentna/017/2009.A partr de dos ensayos independientes, se observaron ttulos virales menores a 10 TCID50/ml para los grupos tratados con G41.2, E13.2, y el suero especifco de ratón; mientras que se detectaron ttulos menores a 10e5TCID50/ml con el VHH no relacionado, y menores que 10e7TCID50/ml, en macerado de pulmón . Estos resultados indicarían una fuerte efcacia en la neutralización viral< in vivo> de los VHHs estudiados, y sugerirían que podrían ser utlizados en tratamientos profláctcos específcos como complemento de las terapias ya existente. Debemos resaltar que estos resultados son preliminares dado que en el presente modelo no obtuvimos pérdida de peso debida a la infección, lo cual indicaría la baja virulencia de la cepa en ratón. Los pasos a seguir involucrarían pasajes seriados de la cepa, con el objeto de obtener su ¨murinización¨. Asimismo, sería necesario probar la capacidad neutralizante de estos VHHs en un modelo animal de infección por contagio como lo son los cobayos.