Estudios de biosimilaridad de proteína recombinante de bajo peso molecular

MARIA PIA VALACCO; SILVIA MORENO DE COLONNA; RICARDO MARTIN NEME TAUIL; JORGE GERMÁN FERNÁNDEZ

2016-01-01

2016-01-01

Salud humana

Se ha podido avanzar con un 95% del proyecto, que incluye determinación de masa molecular intacta,y mapeo peptídico por MS y MSMS de la proteína. Para el mapeo peptídico, que pretende cubrir la mayor parte de lasecuencia por MS y MSMS, se comenzó realizando digestiones virtuales para determinar enzima óptima para obtenerla mayor cobertura posible, usando enzimas que permitan detectar zonas complementarias de la secuencia, y paraasegurarnos de cubrir extremos N y C terminales. A partir de este análisis se decidió realizar digestiones enzimáticasde la molécula con varias proteasas de sitio de corte específico.(Tripsina, corta a la derecha de lisinsa y argininas;Quimotripsina, corta a la derecha de triptofano, metionina, fenilalanina, tirosina, leucina; Gluc-c, corta a la derecha deglutámico) y análisis de los fragmentos proteolíticos por MS y MSMS con nanoHPLC, acoplada a Q Exactive para lograrcobertura total de la secuencia con los péptidos identificados. Se logró una cobertura de aproximadamente un 100% porMS y 98% por MSMS. Esto se logró gracias a la compra de de la enzima Asp-N, que corta a la izquierda de Asparaginas,que tal como esperábamos permitió lograr el 100% de cobertura por MS. Para la determinación de masa molecular laintacta actualmente se está intentando dereterminar por HPLC, acoplado a MSMS con tecnología Orbitrap (Q Exactive).