PERSONAL DE APOYO
NEME TAUIL Ricardo Martin
convenios, asesorías y/o servicios tecnológicos
Título:
CT-Validación de de proteína recombinante
Autor/es:
MORENO DE COLONNA, SILVIA; FERNÁNDEZ, JORGE GERMÁN; VALACCO, MARÍA PÍA; NEME TAUIL, RICARDO MARTÍN
Fecha inicio:
2020-05-01
Fecha finalización:
2020-09-01
Campo de Aplicación:
Tecnologia sanitaria y curativa-Varios
Descripción:
La empresa interesada en el servicio nos provee con aproximadamente 500 microgramos de diferentes lotes de la proteína que se desea verificar.Se realizan estudios de caracterización de la proteína en cuanto a su secuencia aminoacídica. Para el mapeo peptídico, que pretende cubrir la mayor parte de la secuencia por MS y MSMS, se comenzó realizando digestiones virtuales para determinar enzima óptima para obtener la mayor cobertura posible, usando enzimas que permitan detectar zonas complementarias de la secuencia, y para asegurarnos de cubrir extremos N y C terminales. A partir de este análisis se decidió realizar digestiones enzimáticas de la molécula con la enzima LysC seguido de un análisis de los fragmentos proteolíticos por nanoHPLC, acoplada a Q Exactive (ESI-Orbitrap) para lograr la mayor cobertura de la secuencia con los péptidos identificados.Se logró una cobertura de alrededor de 100% en los diferentes lotes, y se observa variabilidad en las secuencias de los diferentes lotes.Se realizaron los informes correspondientes.