Desarrollo de una técnica diagnóstica de amiloidosis por espectrometría de masas

NEME TAUIL, RICARDO MARTÍN; VALACCO, MARÍA PÍA; FERNÁNDEZ, JORGE GERMÁN; NUCIFORA, ELSA; SÁEZ, MARÍA SOLEDAD; SORROCHE, PATRICIA; AGUIRRE, MARÍA ADELA; POSADAS, MARÍA LOURDES; POMATA, PABLO; LUX-LANTOS, VICTORIA ADELA; MORENO, SILVIA

Potrero de los Funes, San Luis

Congreso; IV Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2022

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa

La amiloidosis es una enfermedad severa poco frecuente que afecta en el mundo 1 en 10000 personas. Se produce cuando ciertas proteínas circulantes, que normalmente son solubles, sufren un plegamiento incorrecto y se acumulan como depósitos fibrilares insolubles en diferentes partes del organismo, lo cual provoca principalmente daño cardíaco, renal o neurológico.El tejido blanco, así como la progresión y la severidad de la enfermedad, dependen de la proteína que forma el depósito fibrilar. La identificación de esta proteína es central para determinar la terapia adecuada. Se han descripto más de 30 proteínas amiloidogénicas. Las fibras amiloideas son visibles como birrefringencia color verde manzana en microscopios con luz polarizada en preparados de tejidos fijados con formalina y embebidos en parafina teñidos con Rojo Congo. El gold standard de la identificación de la proteína amiloide es el denominado LMD/MS que consiste en una microdisección laser del material birrefringente teñido con Rojo Congo y posterior análisis de ese material por espectrometría de masas en tándem1. Este ensayo fue desarrollado en la Clínica Mayo por Ahmet Dogan. Actualmente se realiza en muy pocos lugares del mundo; ninguno en América Latina. En un convenio con el Grupo de Estudio de Amiloidosis (GEA) del Hospital Italiano de Buenos Aires (HIBA) y el Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME/Conicet), el CEQUIBIEM está desarrollando esta técnica diagnóstica para poder ofrecerla luego en el país y en América Latina.El primer conjunto de muestras consistió en muestras patológicas de corazón (9), cavidad oral (2), hígado (1), laringe (1), recto (1) y 3 muestras control de corazón. Las muestras provistas por el HIBA consistieron en preparados histopatológicos teñidos con Rojo Congo, y trozos de biopsias fijadas y embebidas en parafina. En el IBYME se puso a punto la microdisección láser; en el CEQUIBIEM se estandardizó el protocolo de extracción de proteínas de las microdisecciones (9 muestras) y de las de las secciones de biopsias fijadas (14). Las 14 muestras patológicas y las 3 muestras control fueron analizadas por nano HPLC, acoplado a un Orbitrap (QExactive) de ThermoScientific. En todos los casos el HIBA disponía ya de un diagnóstico de la amiloidosis de cada paciente, a partir de datos clínicos y datos de laboratorio e histopatológicosLos resultados fueron muy promisorios. En 6 de las 9 muestras analizadas por LMD/MS, se detectó la proteína amiloidogénica. En las 14 muestras de biopsias analizadas directamente por LC/MS se detectó la proteína amiloidogénica. En todos los casos se pudieron identificar las 5 proteínas que en la literatura se describen como “signature”, y que acompañan a la fibra amiloide (Apolipoproteina A-IV. Apolipoproteina A-I; Apolipoproteina E, Serumamyloid yVitronectina).Llama mucho la atención que se hubieran podido detectar las proteínas amiloidogénicas con alta abundancia en las muestras de biopsia que no fueron microdisectadas, en las cuales las fibras amiloides se encuentran diluidas respecto al análisis en muestras LMD/MS. Esto sugiere que debe haber una acumulación granular de estas proteínas en esos tejidos. Esto ha sido sugerido en la literatura pero no reportado en experimentos de espectrometría de masas. El desarrollo de esta técnica diagnóstica aún aguarda el análisis de más muestras patológicas provenientes de otros tejidos así como de muestras control para cada tejido, pero los resultados preliminares sugieren que estamos en condiciones de ponerla a punto para su desarrollo y aplicación.1Dogan, A.(2017)Amyloidosis: Insights from Proteomics.AnnuRevPathol. 24(12):277-304.