El interactoma de p8, una proteína multifuncional relacionada al establecimiento de tumores

VALACCO, MP; VARONE, CL; IOVANNA, JL; MORENO, SM; BURLINGAME, AL

Villa Carlos Paz, Cordoba, Argentina

Congreso; XLIV Reunion Anual SAIB; 2008

Sociedad Argentina de Investigacion Bioquimica

p8 es una proteína de 8 kDa que fue identificada en rata debido a su inducción durante la fase aguda de la pancreatitis. Luego fue caracterizada en humano y ratón. Han sido propuestas para p8 distintas funciones relacionadas a la regulación del crecimiento celular y el estrés celular, dado que se vió que los niveles de expresión de p8 se ven aumentados en líneas celulares en respuesta al estrés y a factores mitogénicos.Un rol importante en la progresión tumoral fue propuesto para p8, ya que fibroblastos, obtenidos de ratones p8 +/+ transformados con un vector retroviral que expresa al oncogen E1A, son capaces de generar tumores al ser inyectados en ratones inmunosuprimidos. En cambio, los fibroblastos transformados provenientes de ratones p8 -/- no presentan capacidades tumorigenicas. Por homología de secuencias se identificó a p8 en diferentes especies de eucariotas superiores, y en todos los casos se identificó una región altamente conservada que correspondería a una NLS bipartita. Ensayos de inmunocitoquimica demostraron que p8 presenta una localización nuclear en cultivos de células subconfluentes y uniforme en toda la célula en cultivos superconfluentes. También se demostró que la importación nuclear de p8 es dependiente de energía y del estado de acetilacion de la células.La NLS de p8 es funcional y es suficiente y necesaria para retener a una proteína heteróloga en el núcleo. El objetivo de este estudio es comprender más profundamente las funciones de p8 en la células, y las vías celulares en las que está involucrada. p8 tiene un tamaño lo suficientemente pequeño como para difundir libremente entre el núcleo y el citoplasma,  el hecho de que presente una NLS y un control estricto de su localización, estaría indicando que formaría parte de complejos multiproteicos. Para verificar esta hipótesis se genero una línea de células HEK 293 que expresa establemente a p8 fusionada al los epitopes FLAG e histidinas. Se realizaron ensayos de copurificacion en tandem, y los eluidos fueron separados en geles de poliacrilamida, teñidos con Coomassie y digeridos con tripsina para su posterior análisis por espectrometría de masas. Con esto se creo una lista de proteínas que interactúan específicamente con p8. Los resultados de este abordaje sumados a ensayos de doble hibrido pre-existentes y datos bibliográficos, permitieron construir el interactoma de p8, el cual indica que p8 estaría asociada a proteínas relacionadas con la reparación del ADN, con el procesamiento del ARNm, la sumoilacion, y la regulación de la división celular. Este análisis permite concluir que p8 es una proteína multifuncional que puede interactuar con distintas proteínas con diversas funciones en diferentes compartimentos celulares.