INVESTIGADORES
VALACCO Maria Pia
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la diversidad funcional de un consorcio bacteriano degradador de fenantreno utilizando un enfoque metaproteómico
Autor/es:
SABRINA FESTA; BIBIANA COPPOTELLI; RICARDO MARTIN NEME TAUIL; MARIA PIA VALACCO; SILVIA MORENO DE COLONNA; IRMA MORELLI
Lugar:
CABA
Reunión:
Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de microbiología; 2016
Institución organizadora:
ALAM CAM 2016
Resumen:
Un consorcio microbiano es una asociación natural de dos o más poblaciones microbianas, de diferentes especies, donde todos se benefician de las actividades de los demás. Su caracterización taxonómica presenta un alto nivel de complejidad, y su caracterización catabólica resulta aún más difícil. En la actualidad, las estrategias ómicas permiten identificar la diversidad microbiana y entender la composición de la comunidad, logrando asignar un rol ecológico a la microbiota no cultivable de un nicho particular. La combinación de metagenómica y metaproteómica brindaría información valiosa sobre la estructura y la fisiología de diferentes grupos filogenéticos presentes en un consorcio bacteriano, logrando relacionar la presencia de un taxón con una actividad metabólica.En ensayos previos, a partir de un suelo crónicamente contaminado con hidrocarburos policíclicos aromáticos (PAH), se obtuvo un consorcio bacteriano degradador de fenantreno (CON). La composición de CON se estudió por métodos dependientes de cultivo, estableciendo la presencia de una cepa degradadora de fenantreno identificada como Sphingobium sp., e independientes de cultivo a través de la pirosecuenciación de fragmentos del gen 16S rRNA, encontrando que CON se formó por 8 órdenes bacterianos: Sphingomonadales, Burkholderiales, Rhodospirillales, Pseudomonadales, Enterobacteriales, Rhizobiales y Xanthomonadales. A través de un enfoque metagenómico funcional se evidenció la presencia de genes codificantes de enzimas involucradas en la ruta de degradación de PAH en fragmentos asignados taxonómicamente al orden Burkholderiales.Con el objetivo de avanzar en el conocimiento de la diversidad funcional de CON durante la degradación de fenantreno en medio líquido, se llevó a cabo un enfoque metaproteómico.Se realizaron cultivos de CON en medio mineral líquido con fenantreno como única fuente de carbono y energía y se llevó a cabo la extracción de proteínas totalesa los 4 y 15 días de incubación. Con las proteínas obtenidas se realizó un análisis por electroforesis bidimensional, en el rango de pH 4-7 y de peso molecular de 6,5 a 200 kDa. Del análisis de los geles se seleccionaron los spots que mostraron mayor discrepancia en la expresión y se analizaron por MALDI TOF/TOF MS/MS para su identificación. De las 21 proteínas identificadas, el 66,67% perteneció a lafamilia Sphingomonadaceaey el 33,33% a la familia Burkholderiaceae, confirmando la importancia funcional, dentro de CON, de las poblaciones pertenecientes al orden Burkholderiales. A ambos días de incubación se identificaron proteínas glutatión S-transferasa, Chaperona GroEL y GroES, Aconitato Hidratasa y dos enzimas dioxigenasa, la subunidad pequeña de antranilato 1,2-dioxigenasa y la subunidad pequeña de la enzima benzeno dioxigenasa. A través del enfoque metaproteómico utilizado se confirmó que los órdenes Sphingomonadales y Burkholderiales se encontraban metabólicamente activos dentro de la comunidad estudiada.