INVESTIGADORES
VALACCO Maria Pia
congresos y reuniones científicas
Título:
Label Free Quantitation: Técnica de cuantificación relativa con un espectrómetro de masa QExactive
Autor/es:
JORGE GERMAN FERNANDEZ; SILVIA MORENO DE COLONNA; MARIA PIA VALACCO
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; III Congreso de la Sociedad Argentina de Espectrometría de masa; 2016
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Espectrometría de masa
Resumen:
El objetivo del trabajo es utilizar la tecnica de Label Free Quantutation (LFQ) para detectar diferencias significativas al analizar diferentes muestras que contienen igual concentración de un digerido tríptico de Saccharomyces cerevisiae pero diferentes concentraciones de un digerido, también tríptico, de Albúmina Sérica Bovina (BSA), y mediante la técnica de Label Free Quantitation (LFQ) detectar significativamente esta diferencia.La técnica LFQ consiste en una primera separación de los péptidos trípticos por una cromatografía líquida en la escala nano (nanoLC) y una posterior identificación de los péptidos por MSMS con el detector de alta resolución Orbitrap. La cuantifiación se basa en las áreas de los espectros de MS de las proteínas.Para lograr esto se utilizó un nanoLC modelo Easy-nLC 1000 Thermo Scientific acoplado a un espectrómetro de masa Q Exactive Thermo Scientific.ResultadosCuadro 1Muestras (Concentración BSA en μg/μl)A (0.001)B (0.0005)C (0.00033)Área9.976E94.279E93.550E9Cuadro 2Muestras comparadasValor empiricoValor teóricoA-B2.331E02A-C2.810E03B-C1.205E01.5DiscusiónEn las 3 comparaciones se observa que los resultados tienden a aproximarse a sus resultados teóricos. Cuando se realiza este tipo de experimentos es común realizar un volcano plot y de esa forma poder ver los cambios diferenciales de todas las proteínas que se encuentran en las muestras. Entre las muestras A-B y A-C se identificaron variaciones significativas en cuento a la cantidad de BSA.ConclusionesEl análisis por Label Free Quantitation nos permitió afirmar que la proteína BSA se encuentra en cantidades relativamente diferentes en las 3 muestras y que no hubo variación en el resto de las proteínas.Referencias:1-Shalit, T.; Elinger, D.; Gabashvili, A; Levin, Y; J. Proteome Res. 2015, 14, 1979-1986.