La glicerldehido-3-fosfato deshidrogenasa podria constituirse en un blanco terapeútico antiparasitario

FACUNDO AGÜERO; ANDREA MAGLIOCO; ALEJANDRA JUAREZ VALDEZ; MARIA PIA VALACCO; SILVIA MORENO; ALICIA G. FUCHS

Cordoba

Congreso; LII Reunion Anual y primer congreso virtual de la Asociacion Argentina de farmacologia experimental; 2020

Asociacion Argentina de Farmacologia Experimental

La hidatidosis quística (HQ) es una zoonosis de distribución mundial causada por la forma larvaria de Echinococcus granulosus s.l. El hombre se comporta como hospedador intermediario accidental. La línea celular EGPE, desarrollada por nuestro laboratorio a partir de protoescólices de origen bovino (Echinococcus granulosus s.l. G1), es utilizada para estudios de drogas antiparasitarias (Echeverría y col, 2010; Fuchs y col, 2014; Ferrulli y col, 2019) y la búsqueda de moléculas con potencial de blanco farmacológico. La Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPD) es una enzima constitutiva y su rol principal está en el metabolismo energético celular. Esta enzima presenta varias isoformas y es común encontrarla en los exosomas. En este trabajo identificamos la presencia de GAPD de las células EGPE en los distintos estadios de crecimiento celular y la proponemos como blanco molecular de drogas antiparasitarias. Los protocolos fueron aprobados por el comité de ética de la UAI. El homogenato de EGPE de 7 y 20 días de cultivo fue utilizado para realizar un WB con suero de pacientes con HQ; en la banda de 37-46 KDa se identificó por proteómica (CEQUIBIEM, FCEyN, UBA) la GAPD (W6UJ19). El homogenato proveniente de un cultivo de 20 días y el sobrenadante de cultivo de colonias quísticas en agarosa de 5 días fueron eluidos en columnas de afinidad (Protein G HP SpinTrap - GE Healthcare): 1 - pool de suero de pacientes de HQ hepática (Dr. J. Gentile, Tandil), y 2 - pool de suero de pacientes con fasciolasis y cisticercosis (Dra. E. Sánchez, Lima, Perú). Las proteínas obtenidas fueron procesadas e identificadas por proteómica. Se identificó GAPD en homogenato de células EGPE de cultivo de 20 días (W6UJ19) y en el sobrenadante de colonias (W6V1T8). En ambas accesiones se encontró 1 péptido perteneciente a GAPD. Estas secuencias proteicas poseen identidad de 70,15 % (W6UJ19) y 75,45 % (W6V1T8) con la enzima humana. No se encontró GAPD en columnas de afinidad de otras parasitosis. Esta enzima está involucrada en regulación transcripcional y post transcripcional de genes, transporte vesicular, mantenimiento de la integridad del ADN y apoptosis. En microorganismos patógenos se ha descripto que GAPD posee funciones en la interacción y adhesión de microorganismos al huésped. Un bloqueo de esta enzima podría significar la desestabilización del parásito induciendo mecanismos de muerte celular.