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1. INTRODUCCIÓN A lo largo de los siglos, materiales compuestos por proteínas, como extractos de plantas, leche, huevo y colas animales, fueron ampliamente utilizados como aglutinantes de pigmentos y también como adhesivos en obras de arte. Las colas animales, de mamíferos o de peces, son polímeros naturales derivados del colágeno, principal proteína estructural de piel, cartílagos, tejido conectivo y huesos. Estas colas son actualmente también muy utilizadas por restauradores de arte como consolidantes y se caracterizan por poseer distintas propiedades fisicoquímicas y mecánicas según su origen y método de preparación (Schellmann, 2007). En el caso de la utilización de huevo como aglutinante, antiguos tratados de pintura dan cuenta de que en algunas pinturas los artistas han utilizado selectivamente yema o clara según los efectos que quisieran dar en la obra (Doerner, 1998). Si bien en la confección y restauración de objetos de arte existe un conocimiento tradicional de cual material es más adecuado para ciertos propósitos, a menudo los conservadores y restauradores no disponen de información de la composición original del objeto para poder elegir la alternativa más adecuada para su tratamiento y/o conservación.Por su parte, en el campo de las ciencias, se han desarrollado gran cantidad de técnicas para la detección de proteínas, pero muy pocas pueden aplicarse al estudio de una obra de arte. La complejidad de las muestras artísticas, el usualmente pequeño tamaño de muestra disponible para el estudio y el estado de conservación, son algunos de los factores que complican el análisis. En el caso de las técnicas más avanzadas, como la espectrometría de masa, la identificación de la proteína se basa en un código único dado por la secuencia de sus aminoácidos dentro de subunidades llamadas péptidos. La determinación de este código específico se asemeja al documento de identidad de un individuo. Así, puede conocerse, no sólo de qué aglutinante proteico se trata, sino también, por ejemplo, al detectarse una proteína de huevo, de qué animal proviene y si es una proteína específica de clara o de yema de huevo, puede conocerse qué fracción del huevo se utilizó y relacionarlo con la técnica artística empleada. Asimismo, con las colas de animales, se puede conocer, por ejemplo, si provienen de hueso o mezclas de tejidos y su origen, es decir, si fueron preparadas a partir de peces o de mamíferos.En este trabajo, se presentará el estudio de aglutinantes proteicos en micro-muestras de murales del siglo XVIII de tres iglesias andinas utilizando las técnicas más avanzadas de espectrometría de masa. Las iglesias fueron seleccionadas por su interés histórico dado que pertenecen a la llamada Ruta de la Plata, que comprendía el trayecto desde la ciudad imperial de Potosí en Bolivia hasta el puerto de Arica en Chile. 2. DESARROLLO Para el desarrollo de este estudio se utilizaron dos técnicas de espectrometría de masa (EM): EM por desorción/ionización mediante láser UV asistida por matriz acoplada a un analizador de tiempo de vuelo (MALDI-TOF) y la EM acoplada a nano cromatografía líquida con ionización por electrospray y detector híbrido cuadrupolo Orbitrap (ESI-Q-Orbitrap). Las muestras fueron tomadas de murales provenientes de las iglesias de Copacabana de Andamarca (Bolivia) (Tomasini, 2016), San Andrés de Pachama (Chile) y de Parinacota (Chile).En primer lugar, se tomaron muestras representativas de la paleta pictórica de cada mural. Luego, cada muestra fue sometida a un proceso de extracción con solventes para separar las proteínas de los lípidos neutros y ácidos grasos libres. A continuación, se realizó la desnaturalización e hidrólisis enzimática de las proteínas para obtener los péptidos a ser analizados por EM. A partir de la huella peptídica obtenida de cada muestra, se compararon los espectros MALDI con perfiles de proteínas de huevo, colágenos, gomas y caseínas, utilizando como fuentes bases de datos y referencias de aglutinantes preparadas en el laboratorio. El análisis por MALDI de las diferentes muestras permitió reconocer rápidamente marcadores específicos de proteínas, que luego fueron confirmados por ESI-Q-Orbitrap (EM/EM). En la Figura 1 se indican en forma resumida las proteínas identificadas y el origen del material utilizado para la confección del mural. En la mayoría de las muestras se identificaron proteínas de huevo y cola animal. Entre los resultados particulares para destacar, puede mencionarse el caso de dos muestras provenientes del mural de Andamarca. En un caso (muestra de tonalidad negra) se encontró un alto contenido de yema sin evidencias de proteínas de clara, mientras que en otra muestra (muestra verde) se halló alto contenido de clara sin evidencia de proteínas de yema. Esto hace presumir que podrían haberse utilizado por separado clara y yema en la preparación de estos tonos, posiblemente para evitar el amarilleo o bien para lograr texturas diferentes (Doerner, 1998). Cabe destacar que las técnicas utilizadas han sido efectivas a pesar del bajo contenido proteico, muy escaso en particular en las muestras de murales de Chile. En cuanto al origen del colágeno, pudo determinarse mediante herramientas informáticas por comparación con bases de datos que es altamente probable un origen bovino. En cuanto al origen del huevo, pudo determinarse con alto grado de confianza que pertenece a la especie gallina (Gallus gallus). Figura 1: Infografía indicando la localización de las tres iglesias estudiadas y los principales resultados de los aglutinantes proteicos. La fotografía del mapa y la fotografía de la iglesia de Parinacota han sido editadas del libro Iglesias de la antigua ruta del Plata, M. Donoso Saint, Ed. por Max Donoso Saint, Santiago (2011).3. CONCLUSIONES La aplicación de MALDI- TOF en combinación con ESI-Orbitrap permitió distinguir en las muestras estudiadas proteínas de yema y/o clara y proteínas de colágeno, logrando también dilucidar el origen del colágeno y del huevo empleados. La posibilidad de discriminar e identificar las proteínas constituye una herramienta única en materiales como los empleados por los artistas donde generalmente se utilizan materiales compuestos por proteínas de distintas fuentes (huevo, leche, cola animal). La ampliación de la aplicación de estas técnicas utilizadas en otros campos de la ciencia, orientadas a la investigación del patrimonio cultural, nos permite aportar a restauradores, conservadores e historiadores información que no sería posible obtener mediante las técnicas tradicionales.AGRADECIMIENTOS Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET) (PIP 11220130100288) Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica (ANPCyT) (PICT-2016-0349), Universidad de Buenos Aires (20020130100008BA), Argentina por el apoyo económico y al Ministerio de Culturas y Turismo of Bolivia por su apoyo.BIBLIOGRAFÍA Doerner, M, 1998. Los materiales de pintura y su empleo en el arte, 6ª ed., Ed. Reverté (Barcelona), 425 págs. Donoso Saint, M., 2011. Iglesias de la antigua ruta del Plata, Ed. por Max Donoso Saint, (Santiago), 331 págs.Schellmann, N.C., 2007. Animal glues: a review of their key properties relevant to conservation. Reviews in conservation (8) págs. 55-66.Tomasini, E., Castellanos Rodríguez, D., Gómez, B., de Faria, D., Rúa Landa, C., Siracusano, G, Maier, M.S., 2016. A multi-analytical investigation of the materials and painting technique of a wall painting from the church of Copacabana de Andamarca (Bolivia). Microchemical journal, (128) págs. 172-180.

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