IDENTIFICACIÓN DEL GEN CODIFICANTE PARA UNA LIPASA Y OBTENCIÓN DE MUTANTES FENOTÍPICAMENTE NULAS PARA ACTIVIDAD LIPASA EN Enterobacter aerogenes

CLEMENTÍN, ANA; FEDRIGO, GRISELDA; CASTELLI, MARÍA EUGENIA Y GARCÍA VÉSCOVI, ELEONORA

Rosario

Congreso; Reunión anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2005

Sociedad de Biología de Rosario

IDENTIFICACIÓN DEL GEN CODIFICANTE PARA UNA LIPASA Y OBTENCIÓN DE MUTANTES FENOTÍPICAMENTE NULAS PARA ACTIVIDAD LIPASA EN Enterobacter aerogenes Clementín, Ana; Fedrigo, Griselda; Castelli, María Eugenia y García Véscovi, Eleonora Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario de Rosario (IBR-CONICET), Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, Universidad Nacional de Rosario. a_clementin@yahoo.com.ar  Enterobacter es un género perteneciente a la familia de Enterobacteriaceae, cuyos integrantes son patógenos oportunistas y están típicamente asociados a infecciones nosocomiales.  En trabajos previos se realizó la búsqueda de potenciales factores de patogenicidad en cepas aisladas de muestras clínicas. De éstas, se seleccionó una cepa uropatógena de Enterobacter aerogenes que presentó actividad lipasa extracelular en ensayos de detección en placa. Se verificó que dicha actividad estaba ausente en cepas aisladas de flora entérica humana normal lo que sugirió su posible rol como factor de virulencia.  Con el objeto de identificar el factor en estudio, se llevaron a cabo dos estrategias: una mutagénesis al azar con un mini-transposón derivado del Tn5, empleando conjugación bipartita y la construcción de una biblioteca genómica de la cepa virulenta en Escherichia coli.  Del rastreo de la mutagénesis se recuperaron 22 mutantes fenotípicamente nulas para la expresión de la actividad lipasa, de las cuales se seleccionaron 8. Seis de éstas fueron clonadas y secuenciadas. El análisis de homología de las secuencias adyacentes a la inserción reveló la presencia de genes pertenecientes al cluster wec, involucrados en la biosíntesis del Antígeno Común de Enterobacterias (ECA). El ECA es un glicolípido de membrana presente en todas las enterobacterias cuya función es aún desconocida. También se identificó una mutante en un gen con homología a waaF, involucrado en la biosíntesis del lipopolisacárido (LPS).  El análisis de los clones obtenidos a partir de la biblioteca reveló la presencia de un clon con actividad lipasa. Su secuencia resultó tener alta homología con el gen phlA que codifica una fosfolipasa extracelular de Serratia liquefaciens.  Como perspectiva futura se pretende estudiar la regulación de este gen codificante de la fosfolipasa y su relación con el ECA, así como también la función de PhlA y su rol en la virulencia.