Purificación de toxoide tetánico utilizando ligandos peptídicos inmovilizados en matrices cromatográficas

M. C. MARTÍNEZ-CERON; L. ÁVILA; S. L. GIUDICESSI; M. FINGERMANN; F. ALBERICIO; S. A. CAMPERI; O. CASCONE

Simposio; SIMPOSIO ARGENTINO DE BIOPROCESOS. SAPROBIO 2016; 2016

SAPROBIO

El toxoide tetánico se utiliza para la producción de vacunas para prevenir el tétanos, una enfermedad causada por la toxina tetánica. Los protocolos de producción de la vacuna consisten en tratar el sobrenadante de cultivo de Clostridium tetani, productor de toxina tetánica, con formaldehido, y luego se realiza una purificación parcial del mismo a través de precipitación con sales y ultrafiltración. La presencia de contaminantes en la vacuna sería responsable de las reacciones adversas frecuentemente observadas a la misma. Resultaría sumamente beneficioso poder introducir una metodología superior de purificación, que no incremente significativamente los costos productivos. En este trabajo se ensayaron bibliotecas combinatorias peptídicas sintéticas con estos fines, realizando un doble screening para la selección de péptidos con afinidad por el toxoide. Una vez analizadas las secuencias obtenidas, el péptido fue inmovilizado en matrices cromatográficas. En las condiciones ensayadas, el 96% del toxoide puro se unió a la misma y presentó una Kd de 1,25 x 10-8 M, determinada por isotermas de adsorción. Cuando se ensayó con el sobrenadante de cultivo el 100 % de la proteína fue recuperada con una pureza moderada. Próximamente se identificarán las proteínas acompañantes con el objetivo de determinar si son formas truncadas del toxoide y/o de la toxina.