Producción fotoquímica de H2O2 por pterinas en solución acuosa

MARIANA VIGNONI; M. LAURA DÁNTOLA; CAROLINA LORENTE; ROSA ERRA-BALSELLS; FRANCO M. CABRERIZO; ANDRÉS THOMAS

La Plata, Argentina

Congreso; Sexto Encuentro Nacional de Investigadores en Temas Relacionados con Sustancias Peroxídicas (6º ENIISP); 2010

INIFTA-UNLP

Introducción: Las pterinas son compuestos heterocíclicos que se encuentran distribuidos en la naturaleza. Por ejemplo, la biopterina (Bip), se acumula en las manchas blancas de pacientes que sufren vitiligo, enfermedad que cursa con depigmentación de la piel. La neopterina (Nep) es sintetizada por macrófagos activados. <!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:SymbolMT; panose-1:0 0 0 0 0 0 0 0 0 0; mso-font-alt:"Times New Roman"; mso-font-charset:161; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:auto; mso-font-signature:129 0 0 0 8 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-language:EN-US;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Poseen un equilibrio ácido-base, y pueden existir en distintos estados de oxidación. Bajo irradiación UV-A (320-400 nm), las pterinas pueden fluorescer, generar especies reactivas de oxígeno (EROs), sufrir oxidación y generar fotoproductos. Objetivos Estudiar la formación de H2O2 a partir de la reacción de oxidación de distintas pterinas al ser irradiadas con luz UV-A. Investigar el mecanismo de reacción. Parte Experimental Compuestos. Las pterinas fueron obtenidas de Schircks Laboratories (Switzerland), y fueron utilizadas sin purificación posterior. El pH de las soluciones se ajustó agregando microgotas de HCl o NaOH. El D2O (Sigma, 99.9%) fue utilizada como solvente y el pH se ajustó con DCl (Aldrich, 99.5% D) y NaOD (CEA) en D2O. Irradiación UV. Los experimentos de irradiación continua se realizaron en celdas de cuarzo (1 cm de camino óptico) o en tubos para RMN, a temperatura ambiente. Las irradiaciones se realizaron con lámparas Rayonet RPR de emisión a 350 nm (Southern N.E. Ultraviolet Co.). Se irradiaron soluciones en ausencia de oxígeno, burbujeando con argón durante 10 minutos. Análisis espectrofotométrico. Los espectros UV-visible se registraron con un espectrofotómetro Hewlett Packard 8452A. Las medidas se realizaron en celdas de cuarzo 1 cm de camino óptico. Los espectros fueron obtenidos a distintos intervalos de tiempo durante la irradiación. Resonancia Magnética Nuclear. Los experimentos fueron realizados en un espectrómetro Bruker AM-500. Se utilizó D2O como solvente. Determinación de H2O2. Para la determinación de H2O2, se utilizó el kit de Cholesterol de Wiener. El H2O2 se cuantifica por el color que produce (absorbancia a 505 nm) al reaccionar con 4-aminofenazona y fenol. Resultados Se irradiaron distintas soluciones de Bip, Nep, 6-hidroximetilpterina (Hmp) y 6-formil-7,8-dihidropterina (H2Fop) de concentración entre 100-150 μM a pH 5.0 y 10.5 en ausencia de aire. En todos los casos, se registró la formación de un compuesto con una banda de absorción centrada en 480 nm. Al airear la solución, se observó una reacción térmica, en la cual desaparece la banda de absorción mencionada y se detecta la presencia de H2O2 indicando que en la fotooxidación de estas pterinas se genera esta especie reactiva de oxígeno. Para determinar la estructura de este intermediario, se realizaron experimentos de RMN, donde se utilizaron soluciones de concentración 2 mM y se obtuvieron espectros de 1HRMN, antes y después de irradiar. Se observó la aparición de dos picos a d = 8.42 y δ = 6.58 ppm.