Biofilm y evaluación fenotípica de cepas de Staphylococcus aureus productor de mastitis bovina.

SCHANZENBACH SF; CÁCERES ME; BUZZOLA FR

Jornada; XI Jornadas de jóvenes Investigadores; 2022

La mastitis bovina causa una disminución de la producción y deterioro de la calidad de la leche, generando pérdidas económicas a la industria lechera. Staphylococcus aureus (S. aureus) es un patógeno difícil de erradicar de los bovinos con mastitis en la Argentina y en todo el mundo. Posee numerosos factores de virulencia, entre ellos, la capacidad de formar biofilms. Los biofilms son comunidades complejas de microorganismos que crecen inmersos en una matriz polimérica extracelular que les brinda protección frente a los antibióticos y el sistema inmunológico. El objetivo de este estudio fue evaluar la capacidad de formar biofilms y otras características fenotípicas de S. aureus proveniente de mastitis bovina.Se aislaron 28 cepas de S. aureus de leches de vacas con mastitis. Se determinó la capacidad de degradación de la caseína, la morfología de macrocolonias en Agar Rojo Congo (ARC), la actividad hemolítica y la formación de biofilms in vitro. Se sembraron 5 µl de un cultivo overnight (ON) en las placas ARC y se incubaron por 48 h a 37 °C. Las macrocolonias se clasificaron por color (rojas/negras) y superficie (lisa/rugosa). Se sembraron 10 µl de un cultivos ON en placas de Agar-leche (5%). Transcurrida la incubación durante 24 h a 37°C se midieron los halos de degradación de caseína. La actividad hemolítica se estudió en placas de agar sangre con estría perpendicular de la cepa S. aureus RN4242 (β-hemolisina positivo) e incubación por 24 h a 37°C. Para la formación de biofilm se seleccionaron 14 cepas al azar y se sembraron en microplacas de poliestireno con medios de cultivo caldo tripteína de soja suplementado con 0.25% de glucosa (TSBg) y Leche-TSBg (en partes iguales). La cuantificación de los biofilms crecidos a 37°C por 24 h se determinó por tinción con cristal violeta y lectura espectrofotométrica a 595 nm. Se observaron colonias rojas o ?no formadoras de biofilm? en un 21,4% (4/28 lisas y 2/28 rugosas) y colonias negras o ?formadoras? en un 17,9 % (1/28 lisas y 4/28 rugosas). Fenotipos intermedios -colonias marrones- se observaron en el 60,7% de las cepas. La actividad proteolítica se estableció en 11/28 cepas (39,3 %) cuyos halos de degradación variaron entre 5-15 mm de diámetro. El 39,3 % (11/28) de las cepas no presentaron actividad hemolítica. El mayor número de cepas hemolíticas presentó α y δ hemolisinas (6/28). Todas las cepas seleccionadas formaron biofilm en TSBg; 9/14 fueron débiles o moderadas formadoras (DO0,6). El 57,1% (8/14) de las cepas formaron biofilm en Leche-TSBg y el 42,9% (6/14) no formaron biofilm en este medio. Las cepas que no formaron biofilm en Leche-TSBg tampoco presentaron halos de degradación de caseína.La caracterización realizada brindó conocimientos primarios sobre las cualidades fenotípicas de estas cepas nativas para continuar investigando sobre sus mecanismos de patogenicidad.