Caracterización de la actividad proteolítica extracelular del microorganismo alcalófilo Bacillus sp. PAT05 aislado de suelos áridos de la Patagonia Extraandina

OLIVERA N,; SEQUEIROS C,; MARGUET ER,; BRECCIA JD,

Florianópolis SC

Simposio; XIV National Symposium on Fermentation - XIV SINAFERM; 2003

Los microorganismos de ambientes expuestos a condiciones selectivas, como los que crecen en suelos alcalinos y salinos de zonas áridas patagónicas son una importante fuente de enzimas con propiedades de interés biotecnológico. Se realizo un programa de selección de microorganismos alcalófilos-halotolerantes con alta actividad proteolítica. De alrededor de 200??? cepas se seleccionó un microorganismo perteneciente al genero Bacillus, denominado Bacillus sp. PAT05?. El mismo fue aislado de la rizósfera de Atriplex lampa, una planta que es capaz de crecer en suelos alcalinos y con alta concentración de sal??. En este trabajo se describe la caracterización de la actividad proteolítica extracelular producida por la cepa Bacillus sp. PAT05. Se analizaron los sobrenadantes del microorganismo cultivado en un medio que contenía 10 g/l extracto de proteína de soja, 100 mM de Na2CO3 y 5% NaCl. La actividad proteolítica se determinó empleando azocaseína como sustrato (0.5 % p/v en la mezcla de reacción). El extracto presentó máxima actividad a una temperatura de 60ºC y en un rango de pH 9-13. La preparación enzimática retuvo un 90% de la actividad máxima en presencia de 0.9 M de NaCl????. La actividad proteolítica del extracto fue fuertemente inhibida por PMSF sugiriendo la presencia de proteasas serínicas, y conservó más del 70 % de su actividad máxima en presencia de agentes desnaturalizantes como SDS (1%), DTT (1 mM) y Urea (4M). El análisis del sobrenadante por PAGE (nativo) y tinción por actividad, permitió establecer la presencia de dos bandas de actividad con diferente peso molecular aparente; una de las cuales mostró tener un pI > 9.3.