Evaluación de dos métodos de extracción de ADN de polillas de la subfamilia Heliothinae (Noctuidae)

ÁVILA, MARÍA NOELIA; GALVÁN, MARTA Z.; SAN BLAS, GERMÁN; CUELLAR, DANIELA

Tucumán

Encuentro; V Encuentro de Lepidoptera Neotropicales; 2015

Universidad Nacional de Tucumán

Para realizar estudios genéticos con insectos de la subfamilia Heliothinae se requiere de ADN de buena calidad. Debido a las actuales limitaciones económicas y de importación, acceder a kits de extracción de ADN resulta casi imposible, por lo que es indispensable contar con un método de extracción eficiente y económico. El objetivo del presente trabajo es avaluar la eficiencia de dos buffer de extracción, uno a base de amonio, Bromuro de cetil trimetil amonio (CTAB) y otro a base de sodio, Dodecilsulfato sódico (SDS), cada uno con dos técnicas de procesamiento del material, pulverización total y troceado con tijera. El material usado para la extracción de ADN fueron tres patas de cada polilla conservadas en etanol. Para los cuatro métodos se utilizó proteinasa K, con incubación a 55° C durante toda la noche, a fin de eliminar proteínas que puedan degradar el ADN. La duración del desarrollo de los protocolos fue de tres días. La pureza del ADN extraído de cada uno de los métodos fue visualizada por electroforesis en gel de agarosa. Como resultado, se pudo observar en gel que la banda del protocolo CTAB con pulverización del material, es bien marcada y definida. La banda de CTAB con material troceado es muy tenue y con el método SDS no se observan bandas, por lo que no es recomendable para extracción de ADN. Para corroborar la calidad del ADN extraído por CTAB con patas molidas, fue sometido a amplificación por PCR de las regiones ISSR, utilizando el cebador AA3. Como resultado se observó un patrón de bandas característico. Esto nos demuestra que el ADN obtenido tiene la calidad necesaria para realizar amplificaciones de secuencias de ADN en reacciones de PCR. Con este trabajo se puede concluir que el protocolo CTAB, es un método que puede utilizarse para hacer extracciones de ADN con la suficiente calidad y pureza, para ser utilizado en las diferentes técnicas moleculares para la identificación y caracterización de especies nativas o exóticas de la Subfamilia Heliothinae, teniendo como limitante la cantidad de material necesario para realizar el protocolo a diferencia de los kits comerciales.