Variación de la actividad de neurotoxina botulínica tipo A durante la purificación por precipitación ácida-alcohólica

CABALLERO PA, SOSA M, DE JONG LIT, CICCARELLI AS, DEGARBO SM, BIANCO MI, LÚQUEZ C, FERNÁNDEZ RA

Mendoza, Argentina

Jornada; VIII Jornadas de Investigación Facultad de Ciencias Médicas. Universidad Nacional de Cuyo.; 2005

Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Cuyo

La neurotoxina botulínica (NTBo) tipo A progenitora, sintetizada como una cadena simple de 150-kDa, se encuentra asociada a componentes no tóxicos hemaglutinantes y no hemaglutinantes, dando lugar a tres complejos multiproteicos, LL, L y M, en asociación no covalente, de 900, 500 y 300 kDa. La NTBo bloquea la liberación de acetilcolina en la placa mioneural produciendo parálisis fláccida. Actualmente, se utiliza farmacológicamente en el tratamiento de ciertos desórdenes de la tonicidad muscular (estrabismo, blefaroespasmo, tortícolis, distonías, espasmo hemifacial, etc.) y como herramienta para estudios en biología molecular y celular. Se produjo y purificó NTBo a partir de la cepa prototipo A-Hall de Clostridium botulinum en medio de diálisis en celofán. Se determinó: 1) la actividad en las diferentes etapas de purificación, estudiando la relación entre toxicidad del compuesto obtenido y la concentración de nitrógeno proteico, y  2) la integridad molecular mediante la capacidad hemaglutinante de eritrocitos humanos y electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE). La potencia se estimó en DL50/ml por el método de Reed y Muench. La concentración de nitrógeno proteico se determinó por el método de Lowry. La purificación se realizó por precipitación ácida-alcohólica (Duff y col.). La actividad tóxica resultó: en el cultivo original 4,49 x 105 DL50/ml, en la 1ª etapa de la purificación 1,20 x 105 DL50/mg de N, en la 2ª etapa 1,03 x 106 DL50/mg de N y en la 3ª etapa 2,00 x 108 DL50/mg de N. El título hemaglutinante resultó: en la 1ª etapa 1:8.195; en la 2ª etapa 1:131.138 y en la 3ª etapa 1:64. Se observa, a modo de conclusión, un aumento en la actividad de 8,5 veces en las etapas I-II y de 153 veces entre las etapas II-III, con un total de 1.300,5.