Propiedades hemaglutinantes de neurotoxinas botulínicas tipo A

C LÚQUEZ, MD SAGUA, MI BIANCO, RA FERNÁNDEZ

Buenos Aires, Argentina

Congreso; X Congreso Argentino de Microbiología; 2004

Asociación Argentina de Microbiología

Las neurotoxinas botulínicas (NTBo) son polipéptidos de 150 kDa producidas intracelularmente por Clostridium botulinum durante la fase de crecimiento logarítmico. Son liberadas al medio circundante asociadas a proteínas no tóxicas, formando complejos precursores. Se cree que esta asociación a proteínas no tóxicas sería importante en la patogénesis del botulismo alimentario (BA) ya que estos componentes preservarían la parte tóxica de los jugos gástrico e intestinal. Además, las NTBo tipo A, B, C, D y G pueden incluir hemaglutininas (HA) en dichos complejos. Estas HA serían importantes en la absorción de las NTBo debido a que se ligarían a receptores de células epiteliales del intestino delgado. Según estudios realizados por otros autores, el origen de las cepas y el medio en que se las incuba son factores condicionantes en la producción de neurotoxina botulínica precursora, hemaglutinina positiva (NTBo/HA+). El objetivo de este trabajo fue determinar la producción de NTBo/HA+ en cepas de C. botulinum tipo A aisladas de brotes de botulismo alimentario y de casos de botulismo del lactante (BL),  incubadas en diferentes medios de cultivo. Se estudiaron 18 cepas de C. botulinum tipo A: 1 de referencia (A-Hall), 4 aisladas de brotes de BA y 13 aisladas de casos de BL. Las cepas se cultivaron en: (1) Peptona-Extracto de levadura-Tripticasa (PET), (2) PET suplementado con suspensión de arvejas, (3) medio de carne picada (MCP), (4) caldo infusión cerebro-corazón (BHI), (5) Peptona-Extracto de levadura-Glucosa (PYG). Se incubaron 5 días a 35ºC en anaerobiosis. La toxina se obtuvo mediante centrifugación del medio (12.000 ×g, 20 min, 4ºC). Para la prueba de hemaglutinación se utilizaron policubetas. Se realizaron diluciones en base dos de las toxinas, utilizando PBS como diluyente y se mezclaron con igual volumen de suspensión al 2% de glóbulos rojos humanos lavados. Luego de 1 h de incubación a temperatura ambiente, se procedió a la lectura. En cada prueba se utilizaron controles positivos y negativos de hemaglutinación.  Las pruebas se realizaron por duplicado y se repitieron al menos dos veces. La formación de un botón en el fondo del pocillo se interpretó como HA negativa. La cepa A-Hall dio un título de HA de: 128 en medio PET, 64 en medio PET suplementado con suspensión de arvejas, 32 en medio PYG, 16 en BHI y 8 en MCP. Para las cepas aisladas de BL y de BA los resultados fueron negativos en todos los casos. En este trabajo se encontró que el origen de las cepas no afectaría la producción de NTBo/HA+ dado que sólo la cepa de referencia A-Hall resultó HA+, mientras que tanto las cepas aisladas de brotes de BA como las de casos de BL fueron HA negativas. Por otro lado, el medio de cultivo sería un factor condicionante en la producción de NTBo/HA+ dado que la cepa A-Hall produjo diferentes títulos de HA en los distintos medios de cultivo empleados.