INVESTIGADORES
BIANCO Maria Isabel
congresos y reuniones científicas
Título:
Avances en la caracterización biofísica y estructural de GumB y GumC
Autor/es:
BIANCO, MI; JACOBS, M; SALINAS, SR; IELPI, L
Lugar:
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XL Reunión Anual Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
El xantano es un exopolisacárido secretado por Xanthomonas campestris. Además de participar en varios procesos biológicos, este polisacárido es utilizado en diferentes sectores de la industria. Los mecanismos de polimerización y secreción del xantano son poco conocidos. Estudios anteriores de nuestro laboratorio sugieren que ambos procesos podrían estar asociados y que involucrarían la participación de dos proteínas de membrana: GumB y GumC1. Nuestro objetivo consiste en estudiar dichos mecanismos, para lo cual planteamos: resolver las estructuras de GumB y GumC, entender sus mecanismos moleculares de acción y saber si estas proteínas interactúan entre sí. Para ello, encaramos estudios biofísicos y estructurales. Por cromatografía de exclusión y dispersión de luz estática, caracterizamos a GumB como un tetrámero (en diferentes condiciones de fuerza iónica) y a GumC como un dímero (en la condición de purificación). El estado oligomérico de GumB y GumC no se vio afectado por incrementos en la concentración proteica. El espectro de dicroísmo circular (DC) en UV-lejano de GumB evidenció la presencia de hélices α y de láminas β; en tanto, GumC mostró un espectro característico de hélices α. El espectro de DC en UV-cercano de GumB sugirió que esta proteína presenta una estructura terciaria compacta y bien plegada, mientras que el espectro de GumC mostró una señal débil, sugiriendo que se trataría de una proteína flexible o de una población heterogénea de estructuras plegadas. La estabilidad térmica de GumB y GumC se estudió por DC. GumB mostró un desplegamiento cooperativo irreversible. GumC acusó un desplegamiento no cooperativo irreversible, con pérdida gradual de estructura secundaria con el incremento de la temperatura, evidenciando estados intermediarios. Recientemente, se resolvió la estructura de GumB mediante cristalografía de rayos X. Actualmente, se está trabajando en su refinamiento. También se obtuvieron cristales de GumC, aunque éstos no presentaron calidad cristalográfica. Por último, para obtener información estructural adicional sobre estas proteínas en solución, se están realizando estudios por SAXS.