INVESTIGADORES
BRECCIA Javier Dario
congresos y reuniones científicas
Título:
Diglicosidasas en el género Acremonium
Autor/es:
MANSILLA IS; BRAUN LE; WEIZ G; NEHER B; BRECCIA JD
Reunión:
Simposio; 3er Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2014
Resumen:
DIGLICOSIDASAS EN EL GÉNERO ACREMONIUM Mansilla, Iara S.; Braun, Lucas E.; Weiz, Gisela; Neher, Barbara D.; & Breccia Javier D. INCITAP-CONICET, Depto. Química, Facultad Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de La Pampa (UNLPam), Av. Uruguay 151, (6300) Santa Rosa, La Pampa, Argentina. javierbreccia@exactas.unlpam.edu.ar Introducción. Los flavonoides son polifenoles ampliamente distribuidos en el reino vegetal. Estos metabolitos secundarios generalmente se encuentran en su forma glicosilada. Las agliconas pueden poseer diferente bioactividad, estabilidad química, biodisponibilidad y/o farmacocinética respecto a los glicósidos originales. Por ejemplo quercetina tiene mayor actividad antioxidante que su glicósido rutina. Las diglicosidasas son enzimas que catalizan la hidrólisis del enlace heterosídico y liberan el disacárido y su correspondiente aglicona. Este mecanismo de desglicosilación es poco frecuente y hasta el momento fueron descriptas sólo cinco enzimas diglicosidasas de origen eucarionte (vegetales y fúngicas). En el presente trabajo se realizó una búsqueda de diglicosidasas en cepas del género Acremonium, dirigida a los flavonoides rutina, diosmina y hesperidina. Metodología. Medios de Cultivo: Luria-Bertani (LB) (g/l): 10.0 peptona de leche, 5.0 extracto de levadura a 25°C. Medios con flavonoides (g/l): 2.5 fuente de carbono (hesperidina, diosmina o rutina), 1.0 peptona de leche, 2.0 extracto de levadura, 15 agar en 100 mM buffer citrato de sodio pH 5 a 25°C. La zona clarificada alrededor las colonias indica hidrolisis del flavonoide y La actividad diglicosidasa se confirmó mediante un análisis zimográfico con el sustrato sintético 4-metilumbeliferil-rutinosido. El crecimiento y el halo de clarificación se midió a partir de imágenes digitales usando el programa ImageJ (National Institutes of Health, USA). Resultados. De las 11 cepas de Acremonium ensayadas, una de ellas (Acremonium sp. 1471) no fue capaz de crecer en ninguno de los medios de cultivo que contenían flavonoides como fuente de carbono. Las 10 cepas restantes crecieron sobre los 3 flavonoides pero ninguna de ellas clarificó los medios con hesperidina y diosmina. Por otro lado, la actividad hidrolítica del flavonoide se detectó en 8 cepas con rutina como fuente de carbono. Sin embargo, la clarificación o hidrólisis del flavonoide no indica la presencia de la actividad diglicosidasa. Esta se confirmó mediante análisis zimográfico con metilumbeliferil-rutinosido, en solo 2 las cepas: Acremonium sp. 12371 y 9003. La tasa de crecimiento radial (Kr) en medio agarizado para las cepas que resultaron positivas fue de 1.29 y 1.37 mm/día para Acremonium sp. 12371 y 9003 respectivamente. Se detectó halo de clarificación alrededor de las colonias a partir del sexto día de crecimiento con una tasa de clarificación de 1.18 y 1.32 mm/día respectivamente. Conclusiones. Nuestro grupo describió la primer diglicosidasa específica para hesperidina y otros 7-O-rutinosidos (EC 3.2.1.168) desde la cepa Acremonium sp. DSM69247. Esta no hidroliza flavonoides 3-O-rutinosilados. Aquí se identificaron 2 cepas de Acremonium sp. productoras de diglicosidas capaces de hidrolizar, el flavonoide rutina (3-O-rutinosilado) y no se detectó esta actividad para los otros flavonoides (hesperidina y diosmina). Indicando que el mecanismo de desglicosilación en un paso único es poco frecuente y que estas enzimas presentan alta especificidad respecto a la ubicación de los residuos sacarídicos.