INVESTIGADORES
BRECCIA Javier Dario
congresos y reuniones científicas
Título:
Actividad diglicosidasa de Cryptococcus carnescens
Autor/es:
FERRERO RL; NEHER B; WEIZ G; BRAUN LE; BRECCIA JD
Reunión:
Simposio; 3er Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2014
Resumen:
ACTIVIDAD DIGLICOSIDASA DE CRYPTOCOCCUS CARNESCENS Ferrero Romina L; Neher Bárbara D; Weiz Gisela; Braun Lucas E. y Breccia Javier D. INCITAP-CONICET, Departamento de Química, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de La Pampa (UNLPam), Av. Uruguay 151, (6300) Santa Rosa, La Pampa, Argentina. javierbreccia@gmail.com Introducción: Las glicosil-hidrolasas constituyen un grupo muy amplio y variado de enzimas cuya característica común es la capacidad de hidrolizar el enlace glicosídico. Dentro de las glicosil-hidrolasas encontramos las diglicosidasas capaces de liberar residuos disacarídicos que se encuentran en la naturaleza unidos a diversas moléculas, como flavonoides, terpenos, isoprenoides, etc. Esta desglicosilación permite la modificación en aromas de vinos como también la eliminación del sabor amargo en jugos de frutas. Las diglicosidasas tienen la habilidad de escindir el disacárido en un solo paso. En este trabajo se caracterizó la actividad diglicosidasa producida por la levadura Cryptococcus carnescens. Metodología: La levadura C. carnescens se cultivó en medio Yeast Malt (YM) y Flavonoid Peptone Yeast (FPY), a 25°C. En el caso de los cultivos en medio sólido, la muestra se obtuvo congelando fracciones de agar desde los halos de clarificación. La actividad hidrolítica se determinó por la liberación de azúcares reductores a 55°C. Se utilizó buffer universal (30mM) en el rango de pH 2,5 - 10 a 30ºC, y se testearon temperaturas comprendidas entre los 30 y 70ºC, con el buffer universal (pH 6). Los zimogramas se realizaron sobre electroforesis nativas PAGE (10% bis/acrilamida) con los sustratos fluorogénicos 4-metilumbeliferil-rutinosido (4-MUR), 4-metilumbeliferil-ramnósido y 4-metilumbeliferil-glucósido. Resultados: La levadura C. carnescens se cultivó en condiciones aeróbicas en medio sólido con los flavonoides, hesperidina, rutina y diosmina, como fuentes de carbono y solo se detectó halo de hidrólisis sobre los dos primeros. El perfil de actividad a diferentes valores pH y temperatura, mostró un máximo a pH 6 y una temperatura de 55ºC. El cultivo con hesperidina como fuente de carbono no exhibió actividad con los sustratos monoglicosilados (4-metilumbeliferil-glucósido y 4-metilumbeliferil-ramnósido). Sin embargo, el análisis zimográfico mostró una banda de actividad, con un Rf de 0.70, con el sustrato 4-metilumbeliferil-rutinósido. Cuando C. carnescens fue cultivado en rutina como fuente de carbono también produjo una banda de actividad diglicosidasa con el mismo Rf de la anterior. Estos resultados sugieren que este microorganismo produce actividad diglicosidasa específica para rutinosa y que podría ser la misma hidrolasa para ambos flavonoides. Por otro lado, no se detectó actividad de transglicosilación sobre aceptores con oxidrilos primarios. Conclusión: El microorganismo C. carnescens desglicosila ambos sustratos (hesperidina y rutina) con una proteína del mismo peso molecular aparente. Este resultado sugiere la presencia de una hidrolasa promiscua no descripta.