Caracterización taxonómica de bacterias marinas por análisis del ADN ribosomal 16S

CRISTÓBAL HA,; BRECCIA JD,; ABATE CM,

San Miguel de Tucuman

Simposio; SIB II Simposio Argentino - Italiano de Biotecnología; 2004

CERELA - Embajada Italiana de Argentina

En diversos ecosistemas Antárticos, microorganismos extremófilos presentan un rol principal en la biodegradación de la materia orgánica. Estos microorganismos no solo son eficiente en áreas frías porque los hábitat que experimentan presentan variaciones de temperaturas que oscilan desde los 0° a 25°C por los que son clasificados dentro de los grupos de psicrófilos y psicrotolerantes. La comparación de las secuencias del ADN ribosomal es una herramienta de gran alcance para deducir relaciones filogenéticas y evolutivas entre diversas especies de bacterias. Estas secuencias han sido obtenidas por métodos de PCR usando cebadores universales que amplifican el ADNr 16S de muchos géneros de bacterias y posterior secuenciación del material amplificado. El objetivo de este trabajo fue la identificación molecular de microorganismos psicrotolerantes aislados a partir de muestras marinas subantárticas. Las muestras empleadas en los aislamientos, fueron contenidos intestinales de organismos bentónicos (langostillas, lapas y centollones) aislados de diferentes zonas del canal de Beagle y muestras de agua de mar del mencionado canal. Las muestras fueron enriquecidas en medio LB líquido conteniendo celobiosa e incubadas a 4° y 15° en agitación constante. Se realizaron pruebas de RFLP para diferenciar y agrupar las cepas aisladas. La caracterización molecular de las cepas se realizó a partir de PCR con el empleo de primers universales para el ADNr 16S, el cual fue empleado para su secuenciación y posterior identificación de la especie. En la edición de las secuencias se emplearon diversos programas (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/; http://workbench.sdsc.edu/ y DNA MAN) para el ingreso a la base de datos. De los resultados obtenidos en los asilamientos se seleccionaron seis cepas por diferencias moleculares (RFLP) y morfológicas. Las cepas fueron identificadas por secuenciación del ADNr 16S y asociada dentro de un grupo con > 98% de identidad por el análisis BLAST del NCBI y el WorkBench. Las cepas identificadas corresponden a; Shewanela sp. G5, Halomonas sp. A5, Pseudomonas sp.G8, Serratia sp. D3, Alomonas sp. D6 y Pseudomonas sp E3.. Las secuencias correspondiente al ADNr 16S de las cepas fueron incorporadas a la base de datos del GenBank en el NCBI, los número de acceso son los siguientes: AY398666, AY745740, AY745741, AY745742, AY745743, y AY745744- Los resultados obtenidos en este trabajo describen y confirman la gran variedad de especies de bacterias que se encuentran en el ambiente marino antártico; como así también corresponde a una fuente de referencia de bacterias identificadas presentes en el Canal de Beagle.