Caracterización Molecular e Identificación de Microorganismos Psicrofilos Marinos

CRISTÓBAL HA,; BRECCIA JD,; ABATE CM,

Buenos Aires.

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología y X Congreso Argentino de Microbiología; 2004

Los microorganismos adaptados al frío son conocidos por su capacidad de producir enzimas con altos niveles de actividad a bajas temperaturas; estas enzimas se conocen como enzimas frío-activas. Estas propiedades pueden ser de gran utilidad en diferentes procesos industriales. Existen aproximadamente 106 células bacterianas por ml de agua de mar superficial en los océanos del mundo. La mayoría de los microorganismos marinos identificados a partir de las secuencias del ADN ribosomal 16S se encuentran depositado en los GenBank. Estas secuencias se han incorporado en bases de datos desde 1990, el índice de nuevas adiciones alcanzó un pico en 1999 sugiriendo que existe una inmensa diversidad microbiana como así también nuevas especies en el ecosistema marino. El objetivo del presente trabajo fue la caracterización de la cepa G5 con actividad beta-glucosidasa aislada a partir de muestras marinas subantárticas. Las muestras usadas para el aislamiento fueron contenidos intestinales de organismos bentónicos (langostillas, erizos, lapas y centollones) aislados de diferentes zonas del canal de Beagle y muestras de agua de mar de dicho canal. Las muestras fueron enriquecidas en una primera etapa en medio mínimo líquido conteniendo celobiosa como fuente de carbono e incubadas a 4° y 15° en agitación constante. Posteriormente fueron sembradas en placas del mismo medio e incubadas a las mismas temperaturas. En la determinación de la actividad β-glucosidasa se empleó una técnica cromatográfica en placas que utiliza el sustrato (p-nitrofenol- β-galactopiranósido), el cual produce una coloración amarilla al ser hidrolizado por la liberación del p-nitrofenol. La caracterización molecular de la cepa se llevó a cabo mediante secuenciación del producto de amplificación del ADNr 16s utilizando los primers universales. El gen de la beta-glucosidasa fue amplificado con primers diseñados en nuestro laboratorio y posteriormente secuenciado el fragmento. Los microorganismos aislados fueron seleccionados por presentar una mayor actividad enzimática beta-glucosidasa a bajas temperaturas. Entre ellos la bacteria G5 fue la que presentó mayor actividad beta-glucosidasa a 4° y 15°. La cepa fue caracterizada como Shewanella isolate G5. Este microorganismo fue aislado a partir del contenido intestinal de Munida subrrugosa. Posteriormente se amplificó un fragmento de 900 pb que correspondió a una parte del gen de la B-glucosidasa, de acuerdo a los resultados de la secuenciación. Tanto las secuencias correspondientes al ADNr 16S como las pertenecientes al gen de la beta-glucosidasa fueron incorporadas al GenBank. Los resultados obtenidos son de interés tanto en el ámbito de la biodiversidad de las especies que están presentes en los mares del sud, como así también de interés biotecnológico por el empleo de enzimas activas en frío en el ámbito industrial.