INVESTIGADORES
BRECCIA Javier Dario
congresos y reuniones científicas
Título:
Síntesis de 4-metilumbeliferil-α-ramnosil-β-glucósido para la detección de actividad diglicosidasa
Autor/es:
MAZZAFERRO LS; PIÑUEL L,; BRECCIA JD
Lugar:
Montevideo
Reunión:
Congreso; Encuentro Regional de Biocatalisis y Biotransformaciones ENREBB2010; 2010
Institución organizadora:
Universidad de la República
Resumen:
Síntesis de 4-metilumbeliferil-α-ramnosil-β-glucósido para la detección de actividad diglicosidasa Laura Mazzaferro,  Lucrecia Piñuel y Javier D. Breccia lauramazzaferro@conicet.gov.ar  Laboratorio de Microbiología y Biocatálisis, CONICET-Depto. Química, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de La Pampa, Santa Rosa, Argentina Los metilumbeliferil-glicósidos son compuestos ampliamente utilizados para la determinación de actividades glicosidasas, dada la alta emisión de fluorescencia que posee 4-metilumbeliferona (4-MU) con respecto a los primeros.  En un trabajo anterior se demostró que la glicosil hidrolasa α-ramnosil-β-glucosidasa de Acremonium sp. SES201 es capaz de transglicosilar en medio acuoso [1]. La especificidad de aceptor fue analizada utilizando hesperidina como donor y diferentes alcoholes aceptores. La enzima fue capaz de transferir unidades de rutinosa (α-ramnosil-β-glucosa) desde el flavonoide a los alcoholes alquílicos primarios y secundarios, pero no a los alcoholes terciarios. Cuando se utilizó el fluoróforo 4-MU como aceptor (30ºC, pH 5) se encontró un producto fluorescente que contenía azúcar en su estructura. En cuanto a la cinética de reacción, este producto alcanzó un máximo de producción a los 30 minutos, disminuyendo un 86% luego de 2 h, mientras que la reacción de hidrólisis mantuvo velocidades iniciales a lo largo del proceso. A fin de escalar la reacción para ensayos de estructura, se diseñó un reactor enzimático inmovilizando la enzima en perlas de quitosano-polietilenimina (1.1 U/g perlas). El producto de interés se purificó y analizó por MALDI-TOF/TOF. Se encontró una señal a una relación carga masa de 507.47 m/z que se correlacionó con el ion esperado para 4-MU rutinósido, [M+Na]+: 507.44 m/z (Fig. 1). Dicho compuesto fue útil para la detección de actividades diglicosidasas en zimogramas de poliacrilamida. Bibliografía 1.  Mazzaferro, L.; Piñuel, L.; Minig, M.; Breccia, J.D. Arch Microbiol 2010, 192, 383-393. Agradecimientos: El presente trabajo fue financiado por Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica (ANPCyT) y Universidad Nacional de La Pampa.