INVESTIGADORES
CASTAGNARO atilio pedro
congresos y reuniones científicas
Título:
Optimización y comparación de métodos de diagnóstico molecular de Huanglongbing (ex Greening)
Autor/es:
ORCE, I. G., M. P. FILIPPONE, L. N. SENDÍN, M. E. ACOSTA, V. MARTÍNEZ, M. G. FOGLIATA Y A. P. CASTAGNARO
Lugar:
San Miguel de Tucumán
Reunión:
Congreso; VI Congreso Argentino de Citricultura; 2010
Institución organizadora:
Asociación Tucumana de Cítricos y EEAOC
Resumen:
La enfermedad Huanglongbing (HLB) es causada por diferentes especies de Candidatus Liberibacter: africanus (Laf) en África, americanus (Lam) en Brasil y  asiaticus (Las) en Asia, Brasil y Florida. La detección e identificación del patógeno se dificultan en ausencia de síntomas o por baja concentración de bacteria, sumado a la distribución desigual de las mismas tanto en el floema de la planta y como en el vector. El objetivo de este trabajo fue optimizar y comparar métodos de diagnóstico molecular basados en la amplificación del ADN de la bacteria mediante PCR (del inglés “polymerase chain reaction”) cuantitativo, utilizando los sistemas de detección “SYBRGreen” y “TaqMan”, y PCR convencional. Los  cebadores y sondas empleados amplifican segmentos de los genes que codifican para las proteínas ribosomales rpl KAJL y para el gen 16S ribosomal. Se utilizaron muestras de ADN de plantas infectadas con Las o Lam, en las que se cuantificó el número de copias del genoma bacteriano/ug de ADN, por comparación con una curva patrón realizada con plásmidos portadores de los genes evaluados. La sensibilidad del PCR cuantitativo fue de 10 a 100 veces superior a la del convencional. “TaqMan” mostró mayor especificidad que “SYBRGreen” donde se detectaron falsos positivos, los cuales fueron eliminados al aumentar la restrictividad del PCR con la temperatura de “annealing”. A partir de la optimización de esta técnica en la Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres, la misma fue implementada para el servicio de diagnóstico en el marco del Programa de Prevención de HLB en Argentina.