INVESTIGADORES
AMARAL Maria Marta
congresos y reuniones científicas
Título:
Acción de las toxinas Shiga tipo-2 y Subtilasa en cultivos primarios de células endoteliales de la microvasculatura glomerular humana.
Autor/es:
AMARAL MARÍA M; SACERDOTI FLAVIA; REPETTO HORACIO A; IBARRA CRISTINA
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVIII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL 2013 Sociedad Argentina de Fisiología XLV REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; 2013
Institución organizadora:
SAIC. SAFIS. SAFE
Resumen:
El Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) asociado a diarrea es una complicación sistémica de la infección por Escherichia coli (STEC) productor de toxina Shiga (Stx) que afecta principalmente a niños menores de 5 años1. En Argentina, el SUH es endémico2 y es la primera causa pediátrica de insuficiencia renal aguda (IRA) y la segunda de insuficiencia renal crónica en niños menores de 5 años de edad, siendo además responsable del 20% de los trasplantes renales en niños y adolescentes3-5. La destrucción de las células endoteliales de la microvasculatura renal, gastrointestinal y de otros órganos y tejidos por acción de Stx es central en la génesis del SUH. Sin embargo, el daño por Stx en el endotelio renal no es suficiente para causar IRA que se observa en pacientes con SUH. Exeni et al.6, postulan que el endotelio sufre un marcado cambio hacia el estado trombótico que dispara la activación y agregación plaquetaria. La interacción de neutrófilos y monocitos con células endoteliales activadas amplificaría la injuria renal7. Recientemente se identificó la citotoxina denominada Subtilasa (SubAB) en cepas de STEC que producen SUH8 y se postula que podría contribuir a la patogenia de esta enfermedad. El objetivo de este trabajo fue estudiar la acción de Stx2 y SubAB sobre las células endoteliales de la microvasculatura glomerular humana para precisar la acción de cada una de ellas y la posible cooperación de sus efectos. Las células endoteliales glomerulares humanas (HGEC) se aislaron de fragmentos de corteza de riñones pediátricos provenientes de nefrectomías realizadas en el Hospital Nacional ?Prof. Alejandro Posadas?. La población celular analizada por citometría de flujo e inmunofluorescencia, presentó un 95% de células positivas para el factor von Willebrand y para la molécula de adhesión endotelio-plaqueta-1. Posteriormente, se analizó la presencia del receptor específico para Stx, globotriaosilceramida (Gb3)9, en la membrana plasmática de HGEC mediante inmunofluorescencia y se evaluaron cambios en su expresión por cromatografía en capa delgada (TLC) luego del tratamiento de HGEC con un inhibidor de la síntesis del Gb3 (5 μM C9, Genzyme). La TLC de los glicolípidos extraídos de HGEC luego de la incubación con C-9 mostró un patrón de bandas similar al obtenido con el estándar purificado de Gb3 aunque de intensidad menor respecto a HGEC no incubadas con C-9. Los niveles de Gb3 se cuantificaron por ensayo enzimático fluorométrico de residuos de galactosa10. La concentración de Gb3 en HGEC incubada 48 hs con C-9 fue significativamente menor comparadas con HGEC control (1.106) (0,28 ± 0,15 μg vs 0,85 ± 0,20, P