INVESTIGADORES
ZANETTI Flavia Adriana
congresos y reuniones científicas
Título:
DISEÑO Y CONSTRUCCIÓN DE VECTORES DE TRANSFERENCIA PARA LA OBTENCIÓN DE VIRUS VACCINIA ANKARA MODIFICADO RECOMBINANTES QUE EXPRESAN ANTÍGENOS DE PATÓGENOS DE BOVINOS
Autor/es:
ZANETTI, FLAVIA ADRIANA; FERRER, MARÍA FLORENCIA; CALAMANTE, GABRIELA
Lugar:
Paseo La Plaza, Ciudad de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Microbiología
Resumen:
   UNIDAD TEMATICA Biotecnología / Biotechnology Institucion/ Institution (Autor Principal/ Responsible Author) Instituto de Biotecnología CICVyA-INTA Castelar, CC 25 (1712) Castelar, Bs. As. Unidad Temática Secundaria / Second Thematic Unit Vacunas e Inmunidad / Vaccines and Immunity Institucion/es / Intitutions (Autores Secundarios / Secundary Authors) Texto Libre Los poxvirus se utilizan eficientemente como vectores para la expresión de genes foráneos y para la construcción de vacunas seguras y efectivas contra enfermedades infecciosas. La cepa MVA (virus vaccinia Ankara modificado) es una cepa del virus vaccinia altamente atenuada, que no replica en la mayoría de las células de mamíferos por lo que se la utiliza como vacuna a virus vivo no replicativo. El objetivo de nuestro trabajo es el desarrollo de vacunas basadas en MVA recombinantes para la prevención de enfermedades de interés pecuario. En este tipo de vacunas la inmunización se consigue en ausencia de replicación viral, eliminándose la posibilidad de diseminación del vector en animales vacunados y hacia otros animales o hacia el medioambiente. Para la obtención de los MVA recombinantes es fundamental diseñar y construir los vectores de transferencia, que llevan secuencias homólogas a regiones del genoma viral que serán el blanco de inserción del gen de interés y permitirán la recombinación homóloga con el virus salvaje. Estas secuencias se encuentran interrumpidas por dos “cassette de expresión” para la expresión del gen de interés o del gen marcador (uid A o lac Z) cada uno bajo regulación de un promotor temprano de poxvirus. Previamente en nuestro laboratorio se obtuvieron dos vectores denominados VT-MVA/HA y VT-MVA/TK que poseen las regiones denominadas izquierda y derecha que corresponden a las posiciones 1-303 y 608-948 del gen de hemoaglutinina (HA) y 1-244 y 325-534 del gen de timidita kinasa (TK) de MVA, respectivamente. En este trabajo se presenta el diseño y la construcción de diversos vectores de transferencia para obtener MVA recombinantes que expresan antígenos de virus que afectan al ganado bovino. En particular, se subclonaron los cassettes para la expresión de las proteínas estructurales VP1 del virus de la fiebre aftosa (cepas A Arg 2000 y A Arg 2001), glicoproteína E2 del virus de la diarrea viral bovina y glicoproteína gD del virus herpes bovino de tipo 1. Las secuencias genómicas que codifican para los antígenos de interés se obtuvieron a partir de diversas construcciones disponibles en nuestro laboratorio, se subclonaron bajo regulación del promotor temprano-tardío sintético (pE/L) de poxvirus y el cassette de expresión pEL-antígeno se subclonó en los VT que poseían el cassette para la expresión del gen marcador uid A (codifica para la enzima ß-glucuronidasa bacteriana) o lac Z (codifica para la enzima ß- galactosidasa bacteriana) bajo regulación del promotor temprano H6 de poxvirus. Así se obtuvieron los vectores de transferencia denominados VTM-HA-VP1A2000/ß; VTM-TK-VP1A2001/GUS; VTM-HA-E2/ß y VTM-TK-gD/GUS. Además, se establecieron las condiciones experimentales de infección con MVA y transfección de cultivos celulares (BHK-21 y fibroblastos de embrión de pollo). De esta forma, la expresión de los genes marcadores se corroboró mediante ensayos de infección y transfección transitoria (a las 24 hs. post infección) en células BHK-21. Conclusiones En esta trabajo se obtuvieron las herramientas iniciales que permitirán la obtención de los MVA recombinantes ya que se obtuvieron los vectores de transferencia que portan los cassettes para la expresión de los genes que codifican para proteínas altamente inmunogénicas de virus patógenos bovinos y se establecieron las condiciones experimentales de infección/transfección. Actualmente, se están realizando los ensayos de infección-transfección estable con el propósito de seleccionar los MVA recombinantes que expresen los antígenos de interés, candidatos a ser evaluados como inmunógenos a virus vivo no replicativo en animales de experimentación