Síntesis y utlilización de un decapéptido involucrado en el epitope reconocido por un anticuerpo monoclonal dirigido contra receptores de citoquinas

C. G. BELLOC; C. PEÑA; V. C. BLANK; L.A. RETEGUI.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, LIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006

El MAb denominado R7B4 reconoce un epitope presente en los receptores de la superfamilia de citoquinas, que incluye a las prolactinas y las hormonas de crecimiento (GH). Con el propósito de identificar dicho epitope se enfrentó el MAb a varios péptidos sintéticos que contenían la secuencia común Trp-Ser-X-Ser-Trp y a partir de los resultados obtenidos se estableció el péptido consenso His- Gly-Tyr-Trp-Ser-Glu-Trp-Ser-Pro-Glu como parte del determinante antigénico reconocido por el MAb. Puesto que el MAb inhibe la unión de la GH de origen humano (hGH) a microsomas de hígado, el péptido consenso debería bloquear el paratope del MAb e impedir su acción. Así, en un experimento representativo, la unión de la  125I-hGH a los receptores de hígado de rata disminuyó de  61.700 cpm ±  1.800 cpm a  39.500 cpm ± 700 cpm  en presencia de 12.5 mg/ml del MAb, mientras que el agregado de 100 mg/ml del péptido revirtió parcialmente la acción del Ab, ya que la cantidad de 125I-hGH unida fue 41.300 cpm ± 230 cpm (p < 0.02). Resultados similares fueron obtenidos con muestras de origen humano. Por otro lado, los Ab dirigidos contra el péptido consenso deberían simular la acción del MAb R7B4. Se halló, en efecto, que varios antisueros obtenidos a partir de ratones inmunizados con diferentes dosis del péptido sintético inhibían en forma directa la unión de la 125I-hGH a microsomas de hígado de rata y humano. Los resultados fueron significativos con p< 0.05 a p< 0.0001.             Simultáneamente, se realizaron experimentos de inmunocitoquímica con el propósito de estudiar el espectro de expresión del epitope R7B4. Hasta el momento se halló que el MAb se une específicamente a líneas celulares tanto de origen humano como murino: N Munc, Wish, MCF7 y CHO.   Los resultados obtenidos sugieren que el péptido consenso que hemos sintetizado forma parte del epitope reconocido por el MAb R7B4, y que dicho epitope se expresa en varios tipos celulares no relacionados entre ellos.