USO COMBINADO DE METODOS CONVENCIONALES Y MOLECULARES PARA LA IDENTIFICACIÓN DE Monilinia fructicola Y Monilinia laxa DEL ALTO VALLE DE RIO NEGRO Y NEUQUEN

SOSA, C.; LOPES, C.A.; DOBRA, A.; LUTZ, C.; SANGORRÍN, M.P

Cordoba

Congreso; Primer congreso argentino de fitopatologia; 2008

En el Alto Valle de Río Negro y Neuquén, M. fructicola no es un patógeno importante, pero dificulta las exportaciones de fruta de carozo a la Unión Europea (cuarentenaria). Por las similitudes morfológicas entre las especies de Monilinia, se hace necesario el uso de herramientas de identificación precisas que garanticen la sanidad en las exportaciones. En este trabajo se identificaron las especies por métodos morfológicos convencionales y moleculares (secuenciación). Se recuperaron 8 aislamientos a partir de ciruelo y duraznos de Cinco Saltos y Gral. Roca. De acuerdo a características morfológicas y culturales, se identificaron los aislamientos mo1: M. laxa (conidios de15,6x8,8μm, tubo germinativo corto, colonia gris-gris humo, escasa esporulación, margen lobulado) y mo2-8: M. fructicola (conidios de 15,5 x 9,8 μm, tubo germinativo largo, colonia beige-gris, abundante esporulación, algunos con estromas, crecimiento concéntrico, borde entero). De cada aislamiento se extrajo el ADN total y se amplificó por PCR la región 5,8S-ITS del ADNr. En todos los casos se obtuvo un fragmento amplificado de 550 pb., el cual se purificó y secuenció, observando una diferencia en 3 posiciones nucleotídicas entre ambas especies. Cada una mostró 100% de homología con secuencias de las respectivas especies presentes en Genbank aisladas de diferentes lugares del mundo. La secuenciación de la región 5,8S-ITS confirmó la identidad de los aislamientos obtenida por los métodos convencionales. Para estudiar aislamientos de M. fructicola a nivel de cepa se utilizó RAPD-PCR con 6 cebadores, de los cuales sólo 3 amplificaron exitosamente y fueron reproducibles (OPA1, OPA11 y R3). El cebador R3 permitió obtener perfiles con número de bandas adecuado para ser utilizado en la caracterización intraespecífica de M. fructicola.