Interacción entre los receptores Mas de angiotensina-(1-7) y el receptor relacionado con el receptor Mas de tipo D, MrgD, de alamandina

SILVA, MAURO G.; RUKAVINA MIKUSIC NL; MAZZITELLI L; GOMEZ KA; GRECCO, HERNÁN E.; GIRONACCI MM

Congreso; 40 Reunión Anual del Consejo Argentino de Hipertensión Arterial; 2019

El sistema renina-angiotensina está compuesto por el eje presor, representado por la angiotensina (Ang) II y el receptor (R) AT1 que media los efectos presores y tróficos de Ang II, y el eje del depresor representado por la Ang- (1-7) y el RMas como mediador de los efectos vasodilatadores, antiinflamatorios y antifibróticos de la Ang- (1-7). La alamandina (ALA), un nuevo componente de este sistema, ejerce efectos mediados por el receptor relacionado con el receptor Mas de tipo D (RMrgD) similares a los de la Ang- (1-7). Recientemente se ha demostrado que la Ang- (1-7) y la alamandina inducen efectos antiinflamatorios en ratones. Dado que tanto el RMas como el RMrgD pertenecen a la familia de receptores acoplados a proteínas G (RAPG), y que los RAPG heteromerizan con otros R afectando así su funcionalidad, planteamos la hipótesis que la acción antiinflamatoria de ambos péptidos resultaría de la heteromerización RMas-RMrgD. Nuestro objetivo es investigar la heteromerización RMas-RMrgD y sus consecuencias funcionales. Se utilizaron células monocíticas humanas (THP-1) diferenciadas en macrófagos y células de riñón embrionario humano (HEK) 293T. La alamandina y la Ang- (1-7) indujeron una disminución en los niveles no se dice niveles proinflamatoriosde interleukina (IL) 6 en los macrófagos humanos. La disminución en los niveles de IL-6 fue mayor frente a la presencia conjunta de ambos péptidos, y este efecto fue bloqueado por el antagonista del RMas, lo que sugiere la interacción RMas-RMrgD. El ensayo de co-inmuno precipitación en células THP-1 confirmó la interacción RMas-RMrgD que apoya la interacción entre ambos Rs. Para evitar la influencia de otros Rs, se evaluó la interacción entre ambos Rs y sus consecuencias funcionales en células HEK293T. El RMas fusionado con la proteína fluorescente amarilla y el RMrgD fusionado con la proteína fluorescente m-cherry se coexpresaron transitoriamente en células HEK293T. El análisis de transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET) mostró que los RMas y RMrgD interaccionan a través de la formación de un heterómero constitutivo, que no fue modificado por sus agonistas. Investigamos la fosforilación de ERK1/2 y Akt después de la estimulación con su agonista. Ang-(1-7) o ALA no tuvieron efecto sobre la fosforilación de Akt en células que expresaron RMas o RMrgD solos, respectivamente. Las células que co-expresaron RMas y RMrgD no mostraron cambios en la fosforilación de Akt respecto de las células que expresaron solo uno de los receptores. En contraste, tanto la Ang- (1-7) como la alamandina promovieron la activación de Akt en las células que expresaron los heterómeros RMas-RMrgD, y este efecto fue prevenido por el antagonista del RMas. No veo q sea parcial? o x estadística sacás esa conclusión? Con respecto a la activación de ERK1/2, ni la Ang- (1-7) ni la alamandina modificaron la fosforilación de ERK1/2 en las células que expresaron cada receptor solo; sin embargo, tanto Ang- (1-7) como alamandina promovieron la fosforilación de ERK1/2 en células que expresaron los conjuntamente ambos Rs (RMas + RMrgD). La preincubación con el antagonista del RMas previno la estimulación de ERK1/2 inducida por ambos ligandos.La Ang- (1-7) provocó un efecto antiproliferativo en las células HEK293T que expresaron el RMas mientras que ALA no indujo ningún cambio en las células HEK293T que expresaron el RMrgD solo. Sin embargo, la ALA indujo una disminución en la proliferación celular en las células HEK293T que expresaron conjuntamente ambos Rs. Nuestros resultados demuestran la existencia de heteromerización RMas-RMrgD, lo cual proporcionaría una explicación en los efectos antiinflamatorios de ALA y Ang- (1-7).