Receptor Mas a nivel neuronal: ¿tràfico diferencial implicado en la hipertensiòn arterial?

CERNIELLO FM, GIRONACCI MM

Tucumàn

Congreso; XXII CONGRESO ARGENTINO DE HIPERTENSIÓN ARTERIAL; 2015

El sistema renina angiotensina (SRA) consiste en dos ejes contrabalanceados: uno presor constituido por el eje Enzima Convertidora de Angiotensina 1/ Angiotensina II/ Receptor AT1 y un eje depresor constituido por Enzima Convertidora de Angiotensina 2/ Angiotensina-(1-7) (Ang-(1-7)/ Receptor Mas (RMas). En la hipertensión arterial existe un desbalance entre ambos brazos. La Ang-(1-7) es el ligando endógeno del RMas. La unión de Ang-(1-7) al RMas no sólo provoca su activación sino que también desencadena eventos celulares que conducen a una rápida atenuación de la respuesta, llamado desensibilización, con la consecuente endocitosis del receptor. Una vez internalizado un receptor, puede ser reciclado a la membrana plasmática, permanecer internalizado o ser direccionado a los lisosomas para su degradación. Hipotetizamos que el tráfico del RMas está alterado en la hipertensión arterial a nivel central, y ello contribuiría al desbalance entre los dos brazos del SRA en la hipertensión. Nuestro objetivo es investigar el mecanismo de internalización y tráfico del RMas a nivel neuronal en condiciones fisiológicas y patológicas, tal como en la hipertensión arterial. Para ello trabajamos con cultivos primarios de neuronas de tallo cerebral de ratas Wistar-Kyoto (WKY) y espontáneamente hipertensas (SHR). Evaluamos en primer lugar el contenido del RMas por Western-Blot e inmunofluorescencia, la afinidad de unión del RMas por su ligando y el contenido intraneuronal endógeno de Ang-(1-7) por radioinmunoensayo (RIA) y observamos: mayor expresión del RMas en neuronas de SHR con respecto a WKY pero menor afinidad de unión por su ligando y menores niveles endógenos de Ang-(1-7). Medimos además por RIA el contenido de Ang-(1-7) intracelular en neuronas estimulas 15 o 30min con Ang-(1-7) 1µM y observamos que los niveles de Ang-(1-7) aumentan como consecuencia del estímulo sugiriendo que el RMas se internaliza unido a su ligando tanto en WKY como en SHR. Para estudiar el tráfico del RMas una vez internalizado, evaluamos colocalización con marcadores de tráfico en neuronas previamente estimuladas con Ang-(1-7) 1µM durante 15 y 30min. El RMas colocalizó con arrestina, proteína que sirve de anclaje con las cubiertas de clatrina para internalizar al receptor, EEA1, marcador de endosomas temprano, y Rab11, marcador de vesículas de reciclado lento a la membrana plasmática, mientras que no se observó colocalización con el marcador de lisosomas. Sorprendentemente, el estímulo indujo un marcado aumento en el contenido del RMas en el núcleo de las neuronas de SHR, determinado por colocalización del RMas con una sonda marcadora de núcleo, no así en las de WKY. Esto sugiere que el ligando estimuló la internalización y posterior translocación del RMas al núcleo en las células neuronales de SHR. Esto último estuvo de acuerdo con los resultados obtenidos por Western-Blot del RMas y por RIA de Ang-(1-7) en fracciones nucleares de neuronas estimuladas 30min con Ang-(1-7) 1µM. Nuestros resultados demuestran que el RMas es endocitado a endosomas tempranos y luego reciclado a la membrana plasmática. Una fracción del RMas es direccionado al núcleo en las células neuronales de SHR, lo cual demuestra que el RMas es regulado diferencialmente en la hipertensión arterial.