Optimización del Aislamiento y Purificación de Celulasas desde caldo de cultivo fúngico mediante el empleo de Sistemas Bifásicos Acuosos

TENAGLIA BRENDA; RODRIGUEZ FERNANDA; FARRUGGIA BEATRIZ

Congreso; XVII Congreso y XXXV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2015

<!-- /* Font Definitions */@font-face{font-family:Arial;panose-1:2 11 6 4 2 2 2 2 2 4;mso-font-charset:0;mso-generic-font-family:auto;mso-font-pitch:variable;mso-font-signature:3 0 0 0 1 0;}@font-face{font-family:Calibri;panose-1:2 15 5 2 2 2 4 3 2 4;mso-font-charset:0;mso-generic-font-family:auto;mso-font-pitch:variable;mso-font-signature:3 0 0 0 1 0;} /* Style Definitions */p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal{mso-style-parent:"";margin-top:0cm;margin-right:0cm;margin-bottom:10.0pt;margin-left:0cm;line-height:115%;mso-pagination:widow-orphan;font-size:11.0pt;font-family:"Times New Roman";mso-ascii-font-family:Calibri;mso-fareast-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:"Times New Roman";mso-ansi-language:ES-AR;}@page Section1{size:612.0pt 792.0pt;margin:72.0pt 90.0pt 72.0pt 90.0pt;mso-header-margin:36.0pt;mso-footer-margin:36.0pt;mso-paper-source:0;}div.Section1{page:Section1;}-->Elbioetanol se puede obtener a partir de celulosa presente en desechos agrícolas.Este proceso requiere de la hidrólisis enzimática de celulosa. La celulosa esdegradada por un complejo enzimático llamado celulasa formado porendoglucanasas, exoglucanasas y β-glucosidasas. Elobjetivo de este trabajo es desarrollar un método separativo de las enzimascelulasas que sea rápido y pueda ser empleado en la industria. Para ello: (i)se caracterizó el perfil de reparto de las enzimas en sistemas bifásicosformados por polietilenglicol (PEG) y citrato de sodio y (ii) se analizó el efectosobre el reparto de diferentes variables: temperatura, fuerza iónica y relaciónde volúmenes de las fases (factor R). Como primer paso se analizó el efecto delpeso molecular del PEG sobre la constante de reparto. Se observó que utilizandoPEG de bajo peso molecular se obtiene una mejor separación de la celulasa delas proteínas totales. En estas condiciones se evaluó el efecto de lasvariables temperatura, fuerza iónica (concentración de NaCl) y factor Rutilizando un diseño factorial completo. Se analizaron como variables de respuestao dependientes la constante de reparto (Kr) y el factor de purificación (FP). Paracada factor o variable independiente se consideraron tres niveles. La variableKr indica que las tres enzimas celulasa se recuperan en la fase inferior y lasproteínas totales en la fase superior. Del análisis estadístico se concluyeque el factor R afecta significativamentey con signo negativo al factor de purificación FP. Por lo tanto, variando lacomposición del sistema bifásico se puede mejorar la purificación de lacelulasa. A partir de los resultados obtenidos se puede concluir que los sistemasbifásicos formados por PEG y citrato de sodio sonpotencialmente aplicables a la purificación de enzimascelulasa.