CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE VIRUS DE LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE AISLADOS DE AVES DE VIDA LIBRE

FLAVIA ZANETTI; ANALÍA BERINSTEIN; EDUARDO PALMA; ELISA CARRILLO

Ciudad de Guatemala, Guatemala

Congreso; XVII Congreso Latino Americano de Avicultura; 2001

Las formas severas de la enfermedad de Newcastle, inducidas por el virus del mismo nombre, producen efectos devastadores en el pollo (huésped habitual) generando importantes pérdidas económicas en la industria avícola. El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) o paramixovirus aviar de tipo1 existe como una variedad de cepas que son clasificadas en base a la severidad de la enfermedad que ocasionan: las cepas no virulentas o lentogénicas, causan infecciones leves o inaparentes del tracto respiratorio mientras que las cepas más virulentas (mesogénicas y velogénicas) causan infecciones agudas del tracto respiratorio y/o infecciones sistémicas que pueden causar la muerte en el pollo. La patogenicidad de las cepas de NDV está directamente relacionada con la secuencia de aminoácidos (aa) en el sitio de clivaje de la glicoproteína F y con la habilidad de las proteasas celulares de clivar las proteínas de los distintos patotipos virales. El sitio de clivaje de la glicoproteína F de cepas virulentas de NDV contiene dos pares de aa básicos separados por Glutamina. En cambio, en las cepas avirulentas el primer aa básico de cada par es reemplazado por un aa no básico. Las aves salvajes pueden comportarse como reservorio natural del NDV y ser una fuente potencial de virus para su reintroducción en las granjas avícolas productoras libres de la enfermedad. Con el objetivo de identificar los principales reservorios naturales de NDV se realizó un muestreo de 919 aves silvestres de hábitos migratorios durante los años 1998, 1999 y 2000. Se colectaron muestras de hisopados cloacales y traqueales pertenecientes a distintas especies de aves capturadas en diversas zonas de la provincia de Buenos Aires y en la región patagónica de la República Argentina. Para el aislamiento viral los hisopados se agruparon en pooles de 5 muestras cada uno y  se  inocularon, por duplicado, en la cavidad alantoidea de huevos embrionados (9-11 días de edad) libres de patógeno específico (SPF) los cuales se incubaron a 37°C durante 5 a 7 días o hasta la muerte del embrión. Posteriormente los huevos fueron enfriados a 4°C durante 24 horas antes de recolectar el líquido alantoideo (LA) el cual fue sometido a un segundo pasaje por huevo. La presencia de NDV en las muestras se determinó mediante el ensayo de Inhibición de la Hemaglutinación (IH) frente a un suero específico obtenido en pollo. El ARN total se extrajo por tratamiento con proteinasa K-SDS a partir de los líquidos alantoideos hemaglutinantes. Posteriormente se realizó la reacción de RT-PCR usando oligonucleótidos iniciadores capaces de amplificar una región de 250 pb de la proteína F que contiene el sitio de clivaje. Los productos de la amplificación se purificaron a partir de gel y se obtuvo la secuencia de nucleótidos por el método de terminadores de cadena (Fentomol, Promega) utilizando los oligonucleótidos iniciadores de la reacción de PCR. Se obtuvieron 5 aislamientos: 23.98, 32.98, 45.98 y 34.98 (se indica el número de pool y el año de su aislamiento); y la muestra individual 88T.00. Los aislamientos 23.98, 32.98, 45.98 y 88T.00 presentaron aminoácidos característicos de cepas no patogénicas. La región del sitio de clivaje de la proteína F del pool 34.98 presentó arginina en posición 113 y lisina en posición 115. El análisis filogenético demostró que los asilamientos argentinos producidos en los años 1998 y 2000 forman un subgrupo y están estrechamente relacionados con los aislamientos D26 y las cepas europeas Queensland/V4 y Ulster. El conjunto de resultados presentados en este trabajo confirman que NDV no patogénicos, diferenciados genéticamente de las cepas vacunales utilizadas en el país, están circulando en la población de aves silvestres. Si bien queda aún por determinar su papel en la epidemiología de la enfermedad los resultados alertan sobre el peligro potencial de la disminución del nivel de inmunidad adquirida por vacunación en los planteles comerciales donde la circulación viral no es actualmente detectada.